一种肿瘤组织植入液及其制备方法与用途技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种肿瘤组织植入液及其制备方法与用途。本发明专利技术所提供的肿瘤植入液以人尤文肉瘤细胞系RD‑ES成瘤后的组织匀浆作为肿瘤微环境模拟基质，并加入EGF、hFGF、ITS、非必需氨基酸以及L‑谷氨酰胺作其他成分。其可以很好提高肿瘤组织的粘附性能，经多种肿瘤细胞验证其可以大大增加人源肿瘤细胞株异种移植的成瘤成功率，对多种肿瘤模型均有很好的效果。同时，本发明专利技术所提供的制备方法简单、成本低，易操作、对操作者要求低。

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤组织植入液及其制备方法与用途
本专利技术属于生物
，具体涉及一种肿瘤组织植入液及其制备方法与用途。
技术介绍
PDX(Patient-DerivedtumorXenograft)人源肿瘤异种移植模型，是指将肿瘤患者的肿瘤组织移植到免疫缺陷小鼠体内，依靠小鼠提供的微环境进行生长而建成的一种肿瘤模型。在PDX模型构建过程中肿瘤微环境（TME）的模拟基质组成是非常重要的因素。小鼠EHS（Engelbreth-HolmSwarm）肉瘤衍生产品是目前实验研究中最常用的肿瘤微环境模拟基质。但是由于EHS的分子组成不能准确模拟人类TME，使得其在人源肿瘤异种移植模型建立过程中会产生差异，影响实验中对人类癌症的侵袭过程的研究。目前商品化的EHS肿瘤衍生产品如Matrigel®、ECM凝胶（Sigma）、Cultrex®BME（Amsbio）、Geltrex®（Gibco）以及ECMatrix™（Millipore）等均以鼠肿瘤组织匀浆为主要成分，很难完全模拟人类肿瘤生长的自然微环境，因此，常常发生临床前和临床数据的不匹配，影响医药研发的成功率。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术针对现有技术中存在的不足，本专利技术的主要目的是提供一种肿瘤组织植入液及其制备方法与用途。本专利技术的组织植入液以人尤文肉瘤细胞系RD-ES成瘤后的组织匀浆为肿瘤微环境模拟基质，提高人源肿瘤细胞株异种移植的成瘤成功率，对多种肿瘤模型均有很好的效果。本专利技术的上述目的通过如下技术方案得以实现：一方面，本专利技术提供了一种肿瘤组织植入液，所述的肿瘤组织植入液以人尤文肉瘤细胞系RD-ES成瘤后的组织匀浆为肿瘤微环境基质；在一个实施方案中，所述肿瘤组织植入液还含有10~40ng/ml表皮细胞生长因子（EGF），10~40ng/ml成纤维细胞生长因子（hFGF），2~8pg/mlITS（细胞培养添加物），1%非必需氨基酸和2mmol/LL-谷氨酰胺中的一种或多种。在进一步的实施方案中，所述的肿瘤组织植入液还含有20ng/ml表皮细胞生长因子，20ng/ml成纤维细胞生长因子，4pg/mlITS，1%非必需氨基酸和2mmol/LL-谷氨酰胺中的一种或多种。另一方面，本专利技术还提供一种肿瘤组织植入液的制备方法，其步骤包括：（1）将人尤文肉瘤RD-ES细胞在85%RPMI-1640+15%FBS的培养基中常规传代后注入小鼠皮下，当小鼠体内肉瘤体积达到250mm3时取出肉瘤组织，液氮冷冻肉瘤组织后将其磨成组织粉末，多次重悬于NaCl缓冲液后，用细胞培养基稀释成不同批次的组织液，合并组织液得到人尤文肉瘤细胞系RD-ES细胞匀浆；（2）在步骤（1）中得到的人尤文肉瘤细胞系RD-ES细胞匀浆中加入10~40ng/ml表皮细胞生长因子、10~40ng/ml成纤维细胞生长因子、2~8pg/mlITS、1%非必需氨基酸和/或2mmol/LL-谷氨酰胺中的一种或多种得到肿瘤组织植入液。在进一步的实施方案中，步骤（1）中所述的人尤文肉瘤细胞系RD-ES细胞匀浆的浓度为20mg/ml。另一方面，本专利技术还提供了上述肿瘤组织植入液在促进人源肿瘤异种移植模型中的用途。进一步地，所述的用途为在人源肿瘤异种移植中促进细胞的粘附。进一步地，所述的肿瘤为肺癌、卵巢癌、胃癌、头颈部癌和/或结直肠癌。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的肿瘤植入液以人尤文肉瘤细胞系RD-ES成瘤后的组织匀浆作为肿瘤微环境模拟基质，并加入EGF、hFGF、ITS、非必需氨基酸以及L-谷氨酰胺作其他成分。本专利技术提供的肿瘤植入液可以很好提高肿瘤组织的粘附性能，经多种肿瘤细胞验证其可以大大增加人源肿瘤细胞株异种移植的成瘤成功率，对多种肿瘤模型均有很好的效果。同时，本专利技术所提供的制备方法简单、成本低，易操作、对操作者要求低。具体实施方式本专利技术公开了一种肿瘤组织植入液及其制备方法与用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。以下实施案例中的方法、设备、材料，如果未进行特别说明，均为本领域常规方法、设备和材料，均可由市场购得。试剂：人尤文肉瘤RD-ES细胞购于上海舜冉，细胞培养基购自于上海英潍捷基，胰蛋白酶（EDTA）购自于Sigma-Aldrich，RPMI-1640购自于上海英潍捷基，FBS购自于Gibco公司。实施例1：人尤文肉瘤细胞系RD-ES细胞匀浆的制备将人尤文肉瘤RD-ES细胞在37℃的5%CO2湿化环境中培养，胰蛋白酶（EDTA）常规传代，每2-3天更换一次培养基（85%RPMI-1640+15%FBS）。在4-6周裸鼠皮下注射2×106个人尤文肉瘤细胞系RD-ES细胞，当小鼠内肉瘤体积达到250mm3时，处死小鼠，取出肉瘤组织，用液氮冷冻；冷冻后的肉瘤组织用冷冻研磨机研磨成组织粉末，取10克组织粉末重悬在20ml预冷的3.4MNaCl缓冲液（pH7.4）中，匀浆后离心后再次重悬于20ml上述NaCl缓冲液中，使用DC蛋白质分析法（Bio-Rad）测定蛋白质浓度，用细胞培养基稀释不同批次的组织液，得到浓度20mg/ml人尤文肉瘤细胞系RD-ES细胞匀浆；−20℃下储存备用（分份存储，每份体积小于0.5ml）。实施例2：肿瘤组织植入液的配置取实施例1中所制备的人尤文肉瘤细胞系RD-ES细胞匀浆，分别加入不同浓度（5、10、20、40ng/ml）的EGF因子制备得到含有不同浓度EGF因子的肿瘤植入液。对得到的肿瘤植入液进行细胞粘附试验。在96孔板中，每孔加入100μlPBS、10μg/mlBSA（Sigma-Aldrich）、分别加入上述含有不同浓度EGF因子的肿瘤植入液，每个浓度六个孔，涂布24小时。植入液分别在PBS中稀释至1:10，第二天去除多余液体，培养板用100μl/孔0.1%BSA孵育2小时，并用PBS洗涤。将6000个100μl无血清培养基中的A549细胞添加到每个孔中，放入在培养箱中培养2h。PBS冲洗掉未粘附的细胞，用10%三氯乙酸固定剩余细胞，用结晶紫染色并在540nm下使用读板机定量。表1是含有不同浓度EGF因子的肿瘤植入液细胞粘附影响对照表。表1.含有不同浓度EGF因子的肿瘤植入液对细胞粘附影响对照表由表1可见，加入浓度为10~40ng/ml的EGF因子后配置得到的肿瘤植入液均具有较高的吸光度，当EGF因子浓度为20ng/ml时测得的吸光度最高。实施例3：肿瘤组织植入液的配置取实施例1中所制备的人尤文肉瘤细胞系RD-ES细胞匀浆，分别加入不同浓度（5、10、20、40ng/ml）的hFGF制备得到含有不同浓度EGF因子的肿瘤植本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肿瘤组织植入液，其特征在于，所述肿瘤组织植入液包括人尤文肉瘤细胞系RD-ES成瘤后的组织匀浆。/n

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤组织植入液，其特征在于，所述肿瘤组织植入液包括人尤文肉瘤细胞系RD-ES成瘤后的组织匀浆。


2.根据权利要求1所述的肿瘤组织植入液，其特征在于，所述的组织植入液还包含有EGF、hFGF、ITS、非必需氨基酸和L-谷氨酰胺中的一种或多种。


3.根据权利要求1所述的肿瘤组织植入液，其特征在于，所述的组织植入液中人尤文肉瘤细胞系RD-ES成瘤后的组织匀浆的浓度为20mg/ml。


4.根据权利要求2所述的肿瘤组织植入液，其特征在于，所述的组织植入液中含有10~40ng/mEGF、10~40ng/mlhFGF、2~8pg/mlITS、1%非必需氨基酸和2mmol/LL-谷氨酰胺中的一种或多种。


5.根据权利要求2所述的肿瘤组织植入液，其特征在于，所述的组织植入液中含有20ng/mEGF、20ng/mlhFGF、4pg/mlITS、1%非必需氨基酸和2mmol/LL-谷氨酰胺中的一种或多种。


6.一种肿瘤组织植入液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晗青，屠志刚，
申请(专利权)人：江苏莱森生物科技研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32