肝癌类器官及其培养方法、培养用培养基和用途技术

本公开涉及一种培养肝癌类器官的方法，该方法包括将肝癌组织细胞与培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述培养基中含有胰岛素生长因子‑2，以所述培养基为基准，所述胰岛素生长因子‑2的浓度为1～50ng/ml，优选为5～10ng/ml；对所述待培养物进行培养扩增，得到肝癌类器官。本公开提供的肝癌类器官的培养方法中，由于所采用的培养基中含有特定浓度的胰岛素生长因子‑2，该特定浓度的胰岛素生长因子‑2能够促进肝癌类器官的体外生长，因此，利用本公开提供的方法进行肝癌类器官培养时，培养成功率较高。

【技术实现步骤摘要】
肝癌类器官及其培养方法、培养用培养基和用途
本公开涉及生物医药
，具体涉及一种培养肝癌类器官的方法、一种用于肝癌类器官培养的培养基、肝癌类器官及其在药物筛选、精准化用药检测及异种移植动物模型中的应用。
技术介绍
原发性肝癌全球每年新发病例数高达85.4万，其中中国发病人数为46.6万，约占全球的55％。但目前，对于人类肝癌的研究，仍然缺乏可以真实再现原发性肝癌肿瘤病理生理的体外模型。常见的肝癌细胞系，由于来自不同个体，在蛋白表达及异种移植成瘤性上具有明显差异。另外，由于肝癌细胞系在构建时转入了永生化基因，二维培养和传代过程中容易出现异化现象，使细胞系表现出与亲代肝癌细胞不同的特性，例如基因突变、生长变快、化疗敏感性增加等。此外，由于使用二维的单层细胞无法模拟出药物对细胞的渗透性能，部分药物对三维培养的细胞和二维培养的单层细胞呈现的杀伤力不同。针对现有肝癌细胞系在进行药物筛选时准确性不高及原代肝癌组织无法在体外传代培养的问题，开发真实性更强的人源肝癌细胞模型，能够推进肝癌精准化用药及药物筛选的准确性。
技术实现思路
本公开的目的是提供一种培养肝癌类器官的方法、一种用于肝癌类器官培养的培养基、肝癌类器官及其在药物筛选、精准化用药检测及异种移植动物模型中的应用。为了实现上述目的，第一方面，本公开提供一种培养肝癌类器官的方法，该方法包括：将肝癌组织细胞与培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述培养基中含有胰岛素生长因子-2，以所述培养基为基准，所述胰岛素生长因子-2的浓度为1～50ng/ml，优选为5～10ng/ml；对所述待培养物进行培养扩增，得到肝癌类器官。可选地，所述待培养物中，所述肝癌组织细胞的浓度为1×104～5×104个/mL，所述基质胶的含量为2～15体积％。可选地，所述培养基中还含有AdvancedDMEM/F12培养基、glutamax、青链霉素、HEPES、B27supplement(withoutvitaminA)、N2supplement、N-acetyll-cysteine、recombinanthuman(Leu15)-gastrinI、recombinanthumanFGF10、forskolin和A83-01。可选地，以所述培养基为基准，所述glutamax的含量为0.1～10体积％，所述青链霉素的浓度为50～200μg/ml，所述HEPES的浓度为5～25mM，所述B27supplement(withoutvitaminA)的含量为1～10体积％，所述N2supplement的含量为0.1～5体积％，所述N-acetyll-cysteine的浓度为0.1～5mM，所述recombinanthuman(Leu15)-gastrinI的浓度为1～50nM，所述recombinanthumanFGF10的浓度为50～200ng/ml，所述forskolin的浓度为1～20μM，所述A83-01的浓度为1～10μM，余量为所述AdvancedDMEM/F12培养基。可选地，所述肝癌组织细胞由肝癌组织经酶解处理得到，其中，所述酶解处理包括：将所述肝癌组织与酶解液混合，得到待酶解物；将所述待酶解物进行培养酶解2～12h，得到酶解产物；对所述酶解产物进行分离处理，得到所述肝癌组织细胞。可选地，所述酶解液中含有DMEM/F12培养基、HEPES、青链霉素、谷氨酰胺和胶原酶，以所述酶解液为基准，所述HEPES的浓度为5～25mM，所述青链霉素的浓度为50～200μg/ml，所述谷氨酰胺的含量为0.1～10体积％，所述胶原酶的含量为1～5ng/ml。第二方面，本公开提供一种用于肝癌类器官培养的培养基，所述培养基中含有胰岛素生长因子-2，以所述培养基为基准，所述胰岛素生长因子-2的浓度为1～50ng/ml，优选为5～10ng/ml。可选地，所述培养基中还含有AdvancedDMEM/F12培养基、glutamax、青链霉素、HEPES、B27supplement(withoutvitaminA)、N2supplement、N-acetyll-cysteine、recombinanthuman(Leu15)-gastrinI、recombinanthumanFGF10、forskolin和A83-01；其中，以所述培养基为基准，所述glutamax的含量为0.1～10体积％，所述青链霉素的浓度为50～200μg/ml，所述HEPES的浓度为5～25mM，所述B27supplement(withoutvitaminA)的含量为1～10体积％，所述N2supplement的含量为0.1～5体积％，所述N-acetyll-cysteine的浓度为0.1～5mM，所述recombinanthuman(Leu15)-gastrinI的浓度为1～50nM，所述recombinanthumanFGF10的浓度为50～200ng/ml，所述forskolin的浓度为1～20μM，所述A83-01的浓度为1～10μM，余量为所述AdvancedDMEM/F12培养基。第三方面，本公开提供第一方面中任意一项所述的方法培养得到的人肝癌类器官。第四方面，本公开提供第三方面中所述的肝癌类器官在药物筛选、精准化用药检测及异种移植动物模型中的应用。通过上述技术方案，本公开提供的肝癌类器官的培养方法中，由于所采用的培养基中含有特定浓度的胰岛素生长因子-2，该特定浓度的胰岛素生长因子-2能够促进肝癌类器官的体外生长，因此，利用本公开提供的方法进行肝癌类器官培养时，培养成功率较高。本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。具体实施方式以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。本公开的第一方面提供一种培养肝癌类器官的方法，该方法包括：将肝癌组织细胞与培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述培养基中含有胰岛素生长因子-2，以所述培养基为基准，所述胰岛素生长因子-2的浓度为1～50ng/ml，优选为5～10ng/ml；对所述待培养物进行培养扩增，得到肝癌类器官。本公开的专利技术人发现，浓度为1～50ng/ml的胰岛素生长因子-2能够促进肝癌组织细胞的体外生长，将其用于肝癌类器官的体外培养时，能够有效提升体外培养肝癌类器官的成功率，基于此提出本公开。在本公开实施例中，具体地，在对所述待培养物进行培养扩增，得到肝癌类器官时，可以将所述待培养物置于培养板(例如可以是24孔培养板或96孔培养板)的培养孔中，使得每孔中含有1×104～5×104个肝癌组织细胞，然后再进行培养。培养过程中，可以先将培养板置于37℃、5％二氧化碳的培养箱中培养30～120min，然后再向每个培养孔中加入150～300μL的培养基，之后每隔3～5天向每孔中补充100～200μL培养基，直至培养孔中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培养肝癌类器官的方法，其特征在于，该方法包括：/n将肝癌组织细胞与培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述培养基中含有胰岛素生长因子-2，以所述培养基为基准，所述胰岛素生长因子-2的浓度为1～50ng/ml，优选为5～10ng/ml；/n对所述待培养物进行培养扩增，得到肝癌类器官。/n

【技术特征摘要】
1.一种培养肝癌类器官的方法，其特征在于，该方法包括：
将肝癌组织细胞与培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述培养基中含有胰岛素生长因子-2，以所述培养基为基准，所述胰岛素生长因子-2的浓度为1～50ng/ml，优选为5～10ng/ml；
对所述待培养物进行培养扩增，得到肝癌类器官。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待培养物中，所述肝癌组织细胞的浓度为1×104～5×104个/mL，所述基质胶的含量为2～15体积％。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基中还含有AdvancedDMEM/F12培养基、glutamax、青链霉素、HEPES、B27supplement(withoutvitaminA)、N2supplement、N-acetyll-cysteine、recombinanthuman(Leu15)-gastrinI、recombinanthumanFGF10、forskolin和A83-01。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，以所述培养基为基准，所述glutamax的含量为0.1～10体积％，所述青链霉素的浓度为50～200μg/ml，所述HEPES的浓度为5～25mM，所述B27supplement(withoutvitaminA)的含量为1～10体积％，所述N2supplement的含量为0.1～5体积％，所述N-acetyll-cysteine的浓度为0.1～5mM，所述recombinanthuman(Leu15)-gastrinI的浓度为1～50nM，所述recombinanthumanFGF10的浓度为50～200ng/ml，所述forskolin的浓度为1～20μM，所述A83-01的浓度为1～10μM，余量为所述AdvancedDMEM/F12培养基。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肝癌组织细胞由肝癌组织经酶解处理得到，其中，所述酶解处理包括：
将所述肝癌组织与酶解液混合，得到待酶解物；
将所述待酶解物进行培养酶解2～12h，得到酶解产物；

【专利技术属性】
技术研发人员：李程，黄思颖，孙志坚，康平，
申请(专利权)人：浙江科途医学科技有限公司，北京科途医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33