一种通过灌流培养工艺制备腺病毒载体疫苗的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过灌流培养工艺制备腺病毒载体疫苗的方法。其中，该方法包括腺病毒宿主细胞的培养步骤，特别是根据细胞密度调节灌流速率（例如至少通过两个阶段调节灌流速率）的步骤。该方法在实现腺病毒宿主细胞高密度生长的同时，提高了感染后的病毒的单细胞产量，以及病毒收获液的比活。

【技术实现步骤摘要】
一种通过灌流培养工艺制备腺病毒载体疫苗的方法
本专利技术涉及生物制品
，具体涉及一种腺病毒宿主细胞的培养方法、腺病毒的生产方法以及腺病毒载体疫苗的制备方法，特别是通过灌流培养工艺制备腺病毒载体疫苗的方法。
技术介绍
腺病毒是一种无包膜DNA病毒，具有易感染、宿主范围广、毒性低、使用安全、容纳量大、非整合性、对人致病性小且不诱导癌变等特点，使得腺病毒载体成为基因转移中最有前途的基因载体之一。改造后的腺病毒去除了E1/E3基因表达盒，阻止了依赖E1区和E3区功能蛋白的转录与随后病毒DNA的复制及病毒外壳蛋白的产生，E1/E3缺失的腺病毒在能够提供E1/E3区基因蛋白的细胞中得到增值。腺病毒具有宿主范围广、高转基因表达能力的特点，目前有高达300种人用治疗或者预防性重组腺病毒药物正用于临床试验，广泛应用的腺病毒载体是人血清型腺病毒Ad5、Ad26型和黑猩猩3、68型腺病毒；以腺病毒作为载体的疫苗也有多个处于临床研究中。重组腺病毒载体疫苗是以腺病毒作为载体，将保护性抗原基因重组到腺病毒基因组中，腺病毒感染细胞后，可以将腺病本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种腺病毒宿主细胞的培养方法，其包括如下步骤：/n（1）接种宿主细胞，进行细胞培养；/n（2）细胞密度达到1×10

【技术特征摘要】
1.一种腺病毒宿主细胞的培养方法，其包括如下步骤：
（1）接种宿主细胞，进行细胞培养；
（2）细胞密度达到1×106~5×106个/mL后开启灌流，灌流速率为1-3VVD；
（3）细胞密度生长至4×106~10×106个/mL后，调节灌流速率至2-4VVD。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述灌流通过利用连续灌流装置进行；所述连续灌流装置采用交替切向流细胞截留系统，其中，中空纤维柱截留孔径为0.1~0.8μm。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞培养中，谷氨酰胺的浓度维持在2mM以上。


4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞为293细胞。


5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞为HEK293细胞或HEK293.CS细胞。


6.一种腺病毒的生产方法，其包括如下步骤：
（1）接种宿主细胞，进行细胞培养；
（2）细胞密度达到1×106~5×106个/mL后开启灌流，灌流速率为1-3VVD；
（3）细胞密度生长至4×106~10×106个/mL后，调节灌流速率至2-4VVD；
（4）接种病毒，培养。


7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述培养为灌流培养，灌...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖猛，刘云杰，朱涛，许允立，徐灿，李军强，巢守柏，
申请(专利权)人：康希诺生物股份公司，
类型：发明
国别省市：天津;12