基于CRISPR-Cas12b系统的空肠弯曲菌检测试剂盒和方法技术方案

本发明专利技术提供一种基于CRISPR‑Cas12b系统的空肠弯曲菌检测试剂盒和方法，所述方法利用CRISPR‑Cas12b系统检测靶标位点，所述靶标位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑3任一所示。本发明专利技术检测方法操作简单，检测时间短，对提取好的样品DNA进行检测，仅需在1小时以内即可出检测结果；对于实际样本菌液进行检测，只需要1‑2小时便可出检测结果：特异性强，灵敏度高，适用范围广。

【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR-Cas12b系统的空肠弯曲菌检测试剂盒和方法
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种基于CRISPR-Cas12b系统的空肠弯曲菌检测试剂盒和方法。
技术介绍
空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni)是一种重要的食源性人畜共患病原菌。空肠弯曲菌可以引起人的腹泻、发热等症状，是细菌行胃肠炎的常见致病菌之一。空肠弯曲菌广泛存在于家禽、家畜以及鸟类的肠道内，在很多动物中属于正常携带细菌，能够通过食物链传递给人类，引起人类疾病。世界卫生组织已经将空肠弯曲菌列为最常见的食源性病原菌之一。空肠弯曲菌作为致病菌检测的一项重要指标，在公共卫生、食品安全、畜牧兽医和出入境检验检疫中均是必需检测的项目，有重要社会、经济意义。目前检测空肠弯曲菌采用的方法主要是传统的分离培养法，但由于空肠弯曲菌的培养条件较为苛刻，使得传统的分离培养法存在操作复杂、灵敏度低、特异性不强等弊端。因此，亟需开发一种快速精准的检测空肠弯曲菌的方法来满足现有的不足。基于Cas12b蛋白开发的CRISPR-Cas(clusteredregular本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于CRISPR-Cas12b系统的空肠弯曲菌检测方法，所述方法利用CRISPR-Cas12b系统检测靶标位点，所述靶标位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-3任一所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR-Cas12b系统的空肠弯曲菌检测方法，所述方法利用CRISPR-Cas12b系统检测靶标位点，所述靶标位点的核苷酸序列如SEQIDNO.1-3任一所示。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述CRISPR-Cas12b系统利用Cas12b和sgRNA进行CRISPR检测，所述sgRNA以所述靶标位点为靶标序列进行设计。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述sgRNA包括核苷酸序列如SEQIDNO.4-6任一或几个所示的序列。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法还包括利用报告基因通过荧光显色技术显示检测结果。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法具体包括
(1)体外转录纯化sgRNA；
(2)提取样品基因组DNA；
(3)加样：将样品基因组DNA、阳性对照或阴性对照分别加入装有CRISPR-Cas12b反应体系的PCR管中，获得对应的样品反应管、阳性反应管或阴性反应管，所述CRISPR-Cas12b反应体系中含有针对空肠弯曲菌设计的sgRNA序列；
(4)CRISPR-Cas12b反应：反应管置于PCR仪上，设置参数，进行PCR反应；

【专利技术属性】
技术研发人员：焦新安，黄钰，张云增，顾丹，黄金林，郁金燕，薛寒，徐晓萌，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32