用于检测肺孢子菌及其耐药性的试剂盒、反应体系和方法技术

本发明专利技术公开用于检测肺孢子菌及其耐药性的试剂盒、反应体系和方法。本发明专利技术的试剂盒包含能够以混合物形式存在的第一引物、第一探针、第二引物、第二探针、第三引物和第三探针，其中，第一引物和第一探针用于在实时荧光PCR第一通道中检测以多拷贝存在的第一靶基因，第二引物和第二探针用于在实时荧光PCR第二通道中检测以单拷贝存在的第二靶基因是否存在耐药相关突变，第二引物中的正向引物和反向引物的摩尔比为1:15‑25，且第二探针的Tm值为73‑76℃。第三引物和第三探针用于在实时荧光PCR第三通道中检测内部质控。本发明专利技术不仅可以检测样品是否存在肺孢子菌，并且还可通过熔解曲线分析检测真菌样本对例如磺胺类药物的耐药性。

【技术实现步骤摘要】
用于检测肺孢子菌及其耐药性的试剂盒、反应体系和方法
本专利技术涉及肺孢子菌检测领域，具体地涉及用于检测肺孢子菌及其耐药性的试剂盒、反应体系和方法。
技术介绍
肺孢子菌病(Pneumocystispneumonia)是由肺孢子菌(P.jirovecii)引起的原虫病，多见于免疫功能低下或缺陷者。目前，广泛的磺胺药物预防法和高效抗逆转录病毒疗法(HAART)减少了肺孢子菌病的发病率，但其仍然成为HIV/AIDS患者以及非HIV免疫功能低下患者发病和死亡的重要原因。临床上肺孢子菌的诊断方法是支气管肺泡灌洗液(BAL)样本的直接镜检，通过标准染色技术和免疫荧光法显色。当样本中真菌载量低时，该方法诊断困难并且需要较高的技术水平。目前，实时PCR法开始被用于肺孢子菌病的检测，其灵敏度高于直接镜检。例如，在《中国病原生物学杂志》第12卷第10期公开了多重定量PCR在肺孢子菌肺炎诊断中的应用，具体公开了提取PCP患者呼吸道标本DNA，分别以Pj线粒体大亚基rRNA(mtLSUrRNA)、主要表面糖蛋白(Msg)、二氢叶酸合成酶为靶基因进行定量P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测肺孢子菌及其耐药性的试剂盒，其特征在于，包含能够以混合物形式存在的第一引物、第一探针、第二引物、第二探针、第三引物和第三探针，其中，第一引物和第一探针用于在实时荧光PCR第一通道中检测以多拷贝存在的第一靶基因，第二引物和第二探针用于在实时荧光PCR第二通道中检测以单拷贝存在的第二靶基因是否存在耐药相关突变，第二引物中的正向引物和反向引物的摩尔比为1:15-25，且第二探针的Tm值为73-76℃。第三引物和第三探针用于在实时荧光PCR第三通道中检测内部质控。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测肺孢子菌及其耐药性的试剂盒，其特征在于，包含能够以混合物形式存在的第一引物、第一探针、第二引物、第二探针、第三引物和第三探针，其中，第一引物和第一探针用于在实时荧光PCR第一通道中检测以多拷贝存在的第一靶基因，第二引物和第二探针用于在实时荧光PCR第二通道中检测以单拷贝存在的第二靶基因是否存在耐药相关突变，第二引物中的正向引物和反向引物的摩尔比为1:15-25，且第二探针的Tm值为73-76℃。第三引物和第三探针用于在实时荧光PCR第三通道中检测内部质控。


2.根据权利要求1所述的用于检测肺孢子菌及其耐药性的试剂盒，其特征在于，所述混合物溶解于缓冲液中，且所述缓冲液包含190-210mMTris-HCl、190-210mMKCl、90-110mM(NH4)2SO4、15-25mMMgSO4，且pH值为8.0-8.5。


3.根据权利要求1所述的用于检测肺孢子菌及其耐药性的试剂盒，其特征在于，进一步包含LSU标准样品和对照样品。


4.根据权利要求1所述的用于检测肺孢子菌及其耐药性的试剂盒，其特征在于，所述第一靶基因为肺孢子菌线粒体核糖体大亚基rRNA基因mtLSU，所述第二靶基因为二氢叶酸合成酶基因DHPS。


5.根据权利要求1所述的用于检测肺孢子菌及其耐药性的试剂盒，其特征在于，所述第一引物的序列如SEQIDNO:1和2所示，所述第二引物的序列如SEQIDNO:3和4所示，所述第三引物的序列如SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏小凯，程天龄，朱丽媛，吉斯·丁格曼斯，
申请(专利权)人：上海捷诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31