一种能够特异性识别阪崎肠杆菌存活细胞的快速定量检测方法及其引物技术

本发明专利技术公开了一种能够特异性识别阪崎肠杆菌存活细胞的快速定量检测方法及其引物，所述检测方法，包括如下步骤：1)制备含有阪崎肠杆菌噬菌体的特异性裂解培养液；2)将步骤1)中制备的裂解培养液分别与标准菌株梯度悬液及样品稀释液共培养；3)通过qPCR测定步骤2)中共培养物Ct值变化量；4)根据步骤3)中△Ct值与标准菌株梯度悬液活菌数的线性关系计算样品中阪崎肠杆菌存活细胞数，实现样品中阪崎肠杆菌存活细胞数快速定量测定。本发明专利技术中的检测方法对死亡细胞和其他菌株无交叉反应，检测周期为5.5h，检测通量高，适合于食品或环境样本中阪崎肠杆菌存活细胞的定量检测，以及快速评价消毒杀菌条件对阪崎肠杆菌的有效性。

【技术实现步骤摘要】
一种能够特异性识别阪崎肠杆菌存活细胞的快速定量检测方法及其引物
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种能够特异性识别阪崎肠杆菌存活细胞的快速定量检测方法及其引物。
技术介绍
阪崎肠杆菌(Enterobactersakazakii，Es)为革兰氏阴性短杆菌，是一种重要的食源性致病菌，能引起新生儿脑膜炎、菌血症和坏死性小肠结肠炎，死亡率达40％-80％。国际食品微生物标准委员会(ICMSF)将Es定义为“对特定人群可产生严重的生命危害及产生慢性实质性或长期影响的后遗症”的致病菌。研究显示Es广泛分布于环境中，其生长速度快，具有耐高参透压，抗干燥特性，在水分活度(Aw)0.3-0.69条件下可存活，低温条件下抗干燥能力增强，极易污染婴幼儿奶粉、乳制品、肉制品等食品，引发食源性疾病爆发。由于Es致病性高和传播性强，是食品中必检的微生物指标之一，建立精确的Es快速检测技术对控制该菌引起的疾病具有重要意义。目前Es检测方法主要有传统微生物培养法、分子生物学检测法和免疫学检测法等。其中，传统微生物培养法是通过分离、纯化培养、生化鉴定等检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能够特异性识别阪崎肠杆菌存活细胞的快速定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)制备含有阪崎肠杆菌噬菌体的特异性裂解培养液；/n2)将步骤1)中制备的裂解培养液分别与标准菌株梯度悬液及样品梯度悬液共培养；/n3)通过qPCR测定步骤2)中共培养物Ct值变化量(△Ct)；/n4)根据步骤3)中△Ct值与标准菌株梯度悬液的活菌数的线性关系计算样品中阪崎肠杆菌存活细胞数。/n

【技术特征摘要】
1.一种能够特异性识别阪崎肠杆菌存活细胞的快速定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)制备含有阪崎肠杆菌噬菌体的特异性裂解培养液；
2)将步骤1)中制备的裂解培养液分别与标准菌株梯度悬液及样品梯度悬液共培养；
3)通过qPCR测定步骤2)中共培养物Ct值变化量(△Ct)；
4)根据步骤3)中△Ct值与标准菌株梯度悬液的活菌数的线性关系计算样品中阪崎肠杆菌存活细胞数。


2.根据权利要求1所述的能够特异性识别阪崎肠杆菌存活细胞的快速定量检测方法，其特征在于，步骤1)中将制备的培养液灭菌冷却后加入过滤除菌处理的噬菌体悬液，形成最终含有102-106PFU/mL阪崎肠杆菌噬菌体的特异性裂解培养液。


3.根据权利要求1所述的能够特异性识别阪崎肠杆菌存活细胞的快速定量检测方法，其特征在于，步骤1)中所述的阪崎肠杆菌噬菌体EspYZU05，保藏编号CCTCCNO：M2016716。


4.根据权利要求1所述的能够特异性识别阪崎肠杆菌存活细胞的快速定量检测方法，其特征在于，步骤2)中优选将样品进行匀浆、稀释处理，制备样品梯度悬液；制备标准菌株梯度悬液；并将样品梯度悬液和标准菌株梯度悬液分别与步骤1)制备的裂解培养液混合，混匀，共培养。


5.根据权利要求1所述的能够特异性...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨振泉，张元嵩，杨晓珺，周文渊，高璐，胡钦，郑香峰，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32