免疫效应细胞及其应用制造技术

一种基因工程化的细胞，所述细胞表达结合抗原的外源性受体，并且表达提高的水平的RUNX3或者外源性的RUNX3。还提供所述细胞的用途以及治疗肿瘤的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫效应细胞及其应用
本专利技术属于免疫治疗领域。更具体地，本专利技术涉及表达结合抗原的外源性受体和表达提高的水平的RUNX3或外源性RUNX3的细胞，特别是免疫效应细胞。
技术介绍
嵌合抗原受体(Chimericantigenreceptor，CAR)是一种人工重组受体，通常含有位于胞外区的单克隆抗体的抗原识别结构域、跨膜区、及免疫应答细胞的胞内激活信号结构域组成。然而，由于生物体，特别是实体瘤的微环境的复杂性，在体外表现出优良效果的候选药物，在体内往往无法表现出相应的效果。
技术实现思路
本文所述的目的在于提供一种基因工程改造的免疫效应细胞，增加免疫效应细胞在肿瘤组织中的驻留及其杀伤能力，进而增加抗肿瘤活性。在一个方面，本文提供了一种基因工程化的细胞，其特征在于，所述细胞表达结合抗原的外源性受体，并且表达提高的水平的RUNX3或者外源性的RUNX3。在一些实施方案中，所述的细胞为免疫效应细胞。在一些实施方案中，所述免疫效应细胞为T细胞。在一些实施方案中，所述的RUNX3是全长人RUNX3或具有与全长人RUNX3相同功能的人RUNX3的片段。在一些实施方案中，所述的RUNX3与SEQIDNO:20所示的序列具有至少90％的同一性。在一些实施方案中，所述RUNX3是组成型表达。在一些实施方案中，所述RUNX3是诱导型表达。在一些实施方案中，所述的抗原是肿瘤抗原或病原体抗原，优选的是肿瘤抗原。在一些实施方案中，所述的肿瘤抗原是实体瘤抗原。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原为GPC3或claudin18.2。在一些实施方案中，所述受体为嵌合受体，选自：嵌合抗原受体(CAR)、修饰的T细胞(抗原)受体(TCR)、T细胞融合蛋白(TFP)、T细胞抗原耦合器(TAC)或其组合。在一些实施方案中，所述受体为嵌合抗原受体。在一些实施方案中，所述的嵌合抗原受体的细胞内结构域含有CD137的胞内共刺激信号域。在一些实施方案中，所述受体的胞外域具有SEQIDNO:42或SEQIDNO:22所示的至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述受体的胞内域含有SEQIDNO:47所示的至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述受体的胞内域还具有SEQIDNO:46或者SEQIDNO:49所示的至少90％同一性的氨基酸序列，或者含有SEQIDNO:46和SEQIDNO:49所示的至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞含有与SEQIDNO:17、19、53、54、55、或56具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的核酸序列。在一些实施方案中，所述细胞还表达外源性细胞因子受体结合蛋白，或外源性细胞因子或其多肽。在一些实施方案中，所述细胞还表达外源性细胞因子。在一些实施方案中，所述外源性细胞因子受体结合蛋白能特异性结合相应的细胞因子受体且增强受体活性。在一些实施方案中，所述外源性细胞因子或其多肽能特异性结合相应的细胞因子受体且增强受体活性。在一些实施方案中，所述的细胞因子与SEQIDNO:39、41或36所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述RUNX3的表达水平相对于野生型提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或者100％。在一些实施方案中，所述RUNX3的表达水平相对于野生型提高的量足以提高所述细胞在非淋巴部位的滞留。在一些实施方案中，所述的细胞因子为组成型表达。在一些实施方案中，所述细胞因子是诱导型表达。在一些实施方案中，所述细胞表达外源性RUNX3。在一些实施方案中，所述受体和/或RUNX3利用病毒载体表达；较佳地，所述的病毒载体包括：慢病毒载体，逆转录病毒载体或腺病毒载体。本另一个方面，本文提供了一种表达构建物，其特征在于，该表达构建物包括顺序连接的：结合抗原的受体的表达盒1和RUNX3的表达盒2，其中所述表达盒之间任选地由选自F2A、PA2、T2A、和/或E2A的串联片段连接。在一些实施方案中，所述的结合抗原的受体的表达盒含有编码SEQIDNO:57、58、59、60、61、或62所示的序列的核酸序列，所述的RUNX3的表达盒具有编码SEQIDNO:20所示的序列的核酸序列。在一些实施方案中，所述表达构建物还含有表达盒3，所述表达盒3含有编码细胞因子的核酸序列，所述细胞因子的序列是与SEQIDNO:36、39、或41所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列。在另一个方面，本文提供了一种表达载体，其包含本文所述的表达构建物。在另一个方面，本文提供了一种病毒，所述病毒包含本文所述的表达载体。在另一个方面，本文提供了一种提高表达嵌合受体的免疫效应细胞在个体中的活力的方法，其特征在于，在免疫效应细胞中提高RUNX3的表达水平。在另一个方面，本文提供了一种提高表达嵌合受体的免疫效应细胞在个体中的活力的方法，其特征在于，通过使所述免疫效应细胞表达外源性的RUNX3来提高所述免疫效应细胞中RUNX3的表达水平。在一些实施方案中，所述的RUNX3是全长人RUNX3或具有与全长人RUNX3相同功能的人RUNX3的片段。在一些实施方案中，所述的RUNX3与SEQIDNO:20所示的序列具有至少90％同一性。在一些实施方案中，所述RUNX3是组成型表达。在一些实施方案中，所述RUNX3是诱导型表达。在一些实施方案中，所述免疫效应细胞还共表达细胞因子。在一些实施方案中，还给予所述个体细胞因子。在一些实施方案中，所述的免疫效应细胞为T细胞。在一些实施方案中，所述的嵌合受体为嵌合抗原受体。在一些实施方案中，还给予所述个体化疗药物。在另一方面，本文提供本文所述的细胞、表达构建物或病毒在制备用于抑制肿瘤或抑制病原体的药物中的应用。在另一方面，本文提供一种一种用于抑制肿瘤或抑制病原体的药物组合物，所述药物组合物包括本文所述的细胞和药学上可接受的载体或赋形剂。在另一方面，本文提供一种用于治疗肿瘤或病原体感染的试剂盒或药盒，所述试剂盒包含本文所述的细胞或药物组合物。在另一方面，本文提供表达提高的水平的RUNX3或者外源性RUNX3并且表达靶向肿瘤抗原的嵌合抗原受体的免疫效应细胞和化疗药物在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。在一些实施方案中，所述化疗药物包括索拉菲尼。在一些实施方案中，所述肿瘤抗原为GPC3或claudin18.2。在一些实施方案中，所述免疫效应细胞为T细胞。在另一方面，本文提供治疗有此需要的患者中的肿瘤的方法，包括向所述患者提供本文所述的细胞。应理解，在本文公开范围内，本文所述的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间可相互组合，这些技术特征的各种具体组合均应视为已经特别地公开。附图说明图1A是PRRL本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因工程化的细胞，其特征在于，所述细胞表达结合抗原的外源性受体，并且表达提高的水平的RUNX3或者外源性的RUNX3。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180503 CN 2018104153678;20180906 CN 201811038855一种基因工程化的细胞，其特征在于，所述细胞表达结合抗原的外源性受体，并且表达提高的水平的RUNX3或者外源性的RUNX3。


如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述的细胞为免疫效应细胞。


如权利要求2所述的细胞，其特征在于，所述免疫效应细胞为T细胞。


如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述的RUNX3是全长人RUNX3或具有与全长人RUNX3相同功能的人RUNX3的片段。


如权利要求4所述的细胞，其特征在于，所述的RUNX3与SEQIDNO:20所示的序列具有至少90％的同一性。


如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述RUNX3是组成型表达。


如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述RUNX3是诱导型表达。


如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述的抗原是肿瘤抗原或病原体抗原，优选的是肿瘤抗原。


如权利要求8所述的细胞，其特征在于，所述的肿瘤抗原是实体瘤抗原。


如权利要求8所述的细胞，其特征在于，所述肿瘤抗原为GPC3或claudin18.2。


如权利要求1-10任一所述的细胞，其特征在于，所述受体为嵌合受体，选自：嵌合抗原受体(CAR)、修饰的T细胞(抗原)受体(TCR)、T细胞融合蛋白(TFP)、T细胞抗原耦合器(TAC)或其组合。


如权利要求11所述的细胞，其特征在于，所述受体为嵌合抗原受体。


如权利要求12所述的细胞，其特征在于，所述的嵌合抗原受体的细胞内结构域含有CD137的胞内共刺激信号域。


如权利要求1-13任一所述的细胞，其特征在于，所述受体的胞外域具有SEQIDNO:42或SEQIDNO:22所示的至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列。


如权利要求1-14任一所述的细胞，其特征在于，所述受体的胞内域含有SEQIDNO:47所示的至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列。


如权利要求15所述的细胞，其特征在于，所述受体的胞内域还具有SEQIDNO:46或者SEQIDNO:49所示的至少90％同一性的氨基酸序列，或者含有SEQIDNO:46和SEQIDNO:49所示的至少90％同一性的氨基酸序列。


如权利要求11所述的细胞，其特征在于，所述细胞含有与SEQIDNO:17、19、53、54、55、或56具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的核酸序列。


如权利要求1-17任一所述的细胞，其特征在于，所述细胞还表达外源性细胞因子受体结合蛋白，或外源性细胞因子或其多肽。


如权利要求18所述的细胞，其特征在于，所述细胞还表达外源性细胞因子。


如权利要求18所述的细胞，其特征在于，所述外源性细胞因子受体结合蛋白能特异性结合相应的细胞因子受体且增强受体活性。


如权利要求18所述的细胞，其特征在于，所述外源性细胞因子或其多肽能特异性结合相应的细胞因子受体且增强受体活性。


如权利要求19所述的细胞，其特征在于，所述的细胞因子与SEQIDNO:39、41或36所示的序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列。


如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述RUNX3的表达水平相对于野生型提高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或者100％。


如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述RUNX3的表达水平相对于野生型提高的量足以提高所述细胞在非淋巴部位的滞留。

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋华，王华茂，李宗海，
申请(专利权)人：科济生物医药上海有限公司，上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31