本发明专利技术涉及结合PLA2‑GIB的人或人源化抗体、它们的产生及其用途。这些抗体表现出有利的特征，特别是用于治疗和诊断目的。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗性抗sPLA2-GIB抗体及其用途本专利技术涉及结合PLA2-GIB的抗体、它们的产生及其用途。这些抗体表现出有利的特性，特别是用于治疗和诊断目的。专利技术背景IB组胰分泌性磷脂酶A2(PLA2-GIB)为一种低分子量(14kD)、高度稳定(7个二硫键)的分泌蛋白，其催化磷脂的sn-2脂肪酰基键的水解以释放游离脂肪酸及溶血磷脂质(Lambeau及Gelb2008)。在人类中，PLA2-GIB基因主要表达于胰腺中，在十二指肠、空肠及胃中具有较弱表达水平(Eskola等人1983a)(Nevalainen及Haapanen1993)。已在诸如肺、眼(Kolko等人2007)及睾丸的其他组织中描述边缘表达。在人类胰腺中，PLA2-GIB主要合成于胰腺腺泡细胞的顶端酶原颗粒部分中(Eskola等人1983a)。亦已在胰岛β细胞的胰岛素分泌颗粒中检测到sPLA2-GIB且其与来自葡萄糖刺激的胰岛的胰岛素共分泌(Ramanadham等人1998)。酶以非活性前形式释放于胰液中且通过前肽的蛋白水解切割活化以产生成熟分泌形式(sPLA2-GIB)。体外实验表明胰蛋白酶及纤溶酶能够以良好效力活化前-sPLA2-GIB(Nakano等人1994)。除了在胃肠道中的作用以外，PLA2-GIB亦在人类血浆中循环((Nishijima等人1983)(Eskola等人1983b)(Sternby1984)(Nevalainen等人1985)(Kitagawa等人1991))。近期，PLA2-GIB被鉴定为在作为病毒血症HIV感染患者中的CD4T淋巴细胞的无应答性的基础的机制中起到关键作用。具体地，证明了sPLA2-IB为造成CD4T淋巴细胞的长期不活化的蛋白质，其迫使CD4T淋巴细胞进入异常活化分化状态，使得CD4T淋巴细胞对某些生理学信号(诸如通过介白素-7传送的信号)不起反应(THEZEJacques等人2015)。因此需要允许抑制PLA2-GIB的酶促活性的针对PLA2-GIB的抗体。专利技术概述本专利技术提供了抗PLA2-GIB抗体及其使用方法。更具体地，本专利技术提供了针对人sPLA2-GIB的治疗性抗体，其可以中和sPLA2-GIB的酶促活性。更具体地，本专利技术的目的涉及结合人sPLA2-GIB的人或人源化抗体或其衍生物。本专利技术的优选的人或人源化抗体结合包含至少一个选自人sPLA2-GIB的W3、R6、K7、K10、C77、Y75、G79和S80的氨基酸残基的表位。本专利技术的进一步优选的抗体是中和抗体。此类抗体的具体例子是抗体#2B，#2B1和#2B2。本专利技术的另一个目的涉及编码如上定义的抗体或衍生物或其轻链或重链或其可变域的核酸分子。本专利技术还涉及包含如上定义的核酸的载体，以及包含此类载体或核酸分子的重组宿主细胞。本专利技术的另一个目的是药物组合物，其包含(i)如上文定义的抗体或衍生物、核酸、载体或重组宿主细胞，和(ii)药学上可接受的载体或赋形剂。本专利技术还涉及如上定义的抗体或衍生物、核酸、载体、重组宿主细胞或组合物，其用作药物，特别是用于用于在有此需要的受试者中治疗免疫病症。本专利技术还涉及用于治疗有此需要的受试者，特别是患有免疫病症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用如上文定义的抗体或衍生物、核酸、载体、重组宿主细胞或组合物。本专利技术的另一个目的涉及产生如上文定义的抗体的方法，包括在适合于抗体表达的条件下培养如上文定义的细胞，和任选地回收所述抗体。本专利技术的治疗性抗体可以用于任何哺乳动物，特别是有此需要的任何人类受试者。它们适合于抑制PLA2-GIB并校正与所述蛋白质的不期望的活性有关的任何疾病。附图简述图1：单克隆抗体14G9的特性。A：对sPLA2-GIB酶促活性的抑制。B：间接ELISA中的稀释曲线。C：竞争性ELISA中的稀释曲线。图2：单克隆抗体14G9对于自HIV-1感染患者分离的血浆对来自一个健康供体的CD4T细胞中磷酸STAT5(phosphoSTAT5)的核移位(nucleartranslocation)的抑制作用的抑制。使用同种型对照单抗未观察到作用。图3：10μg单克隆抗体14G9对于自HIV-1感染患者分离的血浆对来自5个不同健康供体的CD4T细胞中的磷酸STAT5的核移位的抑制作用的抑制。使用10μg同种型对照单抗或非抑制性#6F7单抗未观察到作用。图4：1mg单克隆抗体14G9对于100μgsPLA2-GIB对自小鼠脾细胞分离的CD4T细胞中磷酸STAT5的核移位的抑制作用的体内抑制。在注射900μg同种型对照单抗时未观察到显著作用。图5：通过竞争性ELISA对14G9人源化变体的亲和力的估计。图6：人源化抗体#1A、#1B、#2A及#2B的标准化热变性。图7：#2B的SEC分析。上部图，#2B的SEC层析图。中间图，经缩放基线。下部图，具有峰值指派的经缩放基线。图8：人源化抗体#2B1及#2B2的标准化热变性。图9：人源化抗体#2B、#2B1及#2B2对人类FcγR的单体IgG结合的流式细胞术分析。图10：#2B对人类FcγR的免疫复合体结合的流式细胞术分析。图11：人源化抗体#2B、#2B1及#2B2的抗体致敏细胞上的抗原与人类FcγR的残留结合的流式细胞术分析。图12：Fab#2B2/sPLA2-IB复合体的晶体结构。sPLA2-GIB主链以灰色及紫色描绘，#2B2Fab轻链呈浅蓝色及粉色，且#2B2Fab重链呈绿色及黄色(A)。Fab#2B2/sPLA2-GIB复合体中的非共价键，sPLA2-GIB主链呈黄色，#2B2Fab轻链呈浅蓝色，且#2B2Fab重链呈绿色(B)。图13：通过14G9或#2B抑制sPLA2-GIB(A)或自HIV-1感染患者分离的血浆(B)对来自一个健康供体的CD4T细胞中的磷酸STAT5的核移位的抑制作用。图14：通过1或2mg#2B2体内抑制100μgsPLA2-GIB对自小鼠脾细胞分离的CD4T细胞中的磷酸STAT5的核移位的抑制作用。在注射1mgμg同种型对照单抗时未观察到显著作用。表1：小鼠V基因或其人源化形式与用作受体序列的可变人类种系之间的一致性百分比。表2：人源化形式与其对应人类种系之间的跨V基因的序列差异的细节。表3：通过人源化抗体抑制sPLA2-GIB酶促活性。结果表述为对照％。表4：通过竞争性ELISA所获得的不同人源化抗体针对重组人类sPLA2-GIB及重组人类前-sPLA2-GIB的估计IC50。表5：人源化抗体的差示扫描量热法。Tm为变性/熔解温度。Tonset为解折叠转变开始的温度。T1/2为在波峰的半高处的转变的宽度。ΔH为量热解折叠焓且反映蛋白质的分子内相互作用的破坏。总面积为整体解折叠焓(热分析图下的总面积)且反映热力学稳定性。表6：#1A、#1B、#2A及#2B人源化抗体的SEC-HPLC分析。表7：通过#2B、#2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.结合人sPLA2-GIB的分离的人或人源化抗体，或其衍生物。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180302 EP 18305229.91.结合人sPLA2-GIB的分离的人或人源化抗体，或其衍生物。
2.权利要求1的抗体或其衍生物，其是单克隆的。
3.权利要求1或2的抗体或衍生物，其结合表位，所述表位参考SEQIDNO:14包含至少一个选自人sPLA2-GIB的W3、R6、K7、K10、C77、Y75、G79和S80的氨基酸残基。
4.权利要求1或2的抗体或衍生物，其竞争性抑制单克隆抗体14G9对人sPLA2-GIB的结合，所述单克隆抗体14G9含有包含SEQIDNO:2的轻链可变区和包含SEQIDNO:3的重链可变区。
5.权利要求1或2的抗体或衍生物，其竞争性抑制单克隆抗体#2B对人sPLA2-GIB的结合，所述单克隆抗体#2B含有包含SEQIDNO:4或由SEQIDNO:4组成的轻链和包含SEQIDNO:5或由SEQIDNO:5组成的重链。
6.权利要求1的抗体或衍生物，其竞争性抑制单克隆抗体#2B1对人sPLA2-GIB的结合，所述单克隆抗体#2B1含有包含SEQIDNO:4或由SEQIDNO:4组成的轻链和包含SEQIDNO:6或由SEQIDNO:6组成的重链。
7.权利要求1的抗体或衍生物，其竞争性抑制单克隆抗体#2B2对人sPLA2-GIB的结合，所述单克隆抗体#2B2含有包含SEQIDNO:4或由SEQIDNO:4组成的轻链和包含SEQIDNO:7或由SEQIDNO:7组成的重链。
8.前述权利要求中任一项的抗体或衍生物，其中和sPLA2-GIB。
9.权利要求1的分离的抗体，其含有包含SEQIDNO:4或由SEQIDNO:4组成的轻链和包含SEQIDN...
【专利技术属性】
技术研发人员：B塔马里特，J泰泽，
申请(专利权)人：迪亚库雷特公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR
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