生产肺炎链球菌荚膜多糖载体蛋白缀合物的方法技术

描述了一种生产肺炎球菌荚膜多糖蛋白缀合物的方法，其中将特定肺炎球菌血清型的一种或多种活化的肺炎球菌多糖和载体蛋白分别冻干，将分别冻干的多糖和载体蛋白在有机溶剂中分别重构，以及然后通过Tee混合将所述重构的多糖和载体蛋白组合在一起并缀合在一起，以生产多糖载体蛋白缀合物。可以将各自包含特定血清型的多糖的多种缀合物用于生产用于疫苗的含有缀合物的组合的多价肺炎球菌免疫原性组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生产肺炎链球菌荚膜多糖载体蛋白缀合物的方法
技术介绍
(1)专利
本专利技术涉及描述了一种生产肺炎球菌荚膜多糖蛋白缀合物的方法，其中将特定肺炎球菌血清型的一种或多种活化的肺炎球菌多糖和载体蛋白分别冻干，其中将分别冻干的多糖和载体蛋白在有机溶剂中分别重构，以及然后通过Tee混合将所述重构的多糖和载体蛋白组合在一起并缀合在一起，以生产多糖载体蛋白缀合物。可以将各自包含特定血清型的多糖的多种缀合物用于生产用于疫苗的含有缀合物的组合的多价肺炎球菌免疫原性组合物。(2)相关领域的描述肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)是一种荚膜细菌，并且是全世界严重疾病的重要原因。1997年，美国疾病控制与预防中心(CDC)估计，美国每年有3,000例肺炎球菌脑膜炎、50,000例肺炎球菌菌血症、7,000,000例肺炎球菌中耳炎和500,000例肺炎球菌性肺炎。参见CentersforDiseaseControlandPrevention,MMWRMorbMortalWklyRep1997,46(RR-8):1-13。此外，这些疾病的并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备组合物的方法，所述组合物包含与载体蛋白共价连接的肺炎链球菌多糖，所述方法包括：/n(a)提供第一干燥的组合物和第二干燥的组合物，所述第一干燥的组合物包含来自一种或多种肺炎链球菌血清型的活化的肺炎链球菌多糖，所述第二干燥的组合物包含载体蛋白；/n(b)分别在有机溶剂中重构所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物并混合，以提供第一均质溶液和第二均质溶液，所述第一均质溶液包含一种或多种活化的多糖，所述第二均质溶液包含所述载体蛋白；/n(c)通过Tee混合将所述第一均质溶液与所述第二均质溶液组合，以生产混合物；和/n(d)向所述混合物中添加还原剂，以生产缀合物溶液，所述缀合物溶液包含与所...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180430 US 62/664,5901.一种制备组合物的方法，所述组合物包含与载体蛋白共价连接的肺炎链球菌多糖，所述方法包括：
(a)提供第一干燥的组合物和第二干燥的组合物，所述第一干燥的组合物包含来自一种或多种肺炎链球菌血清型的活化的肺炎链球菌多糖，所述第二干燥的组合物包含载体蛋白；
(b)分别在有机溶剂中重构所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物并混合，以提供第一均质溶液和第二均质溶液，所述第一均质溶液包含一种或多种活化的多糖，所述第二均质溶液包含所述载体蛋白；
(c)通过Tee混合将所述第一均质溶液与所述第二均质溶液组合，以生产混合物；和
(d)向所述混合物中添加还原剂，以生产缀合物溶液，所述缀合物溶液包含与所述肺炎链球菌血清型的一种或多种多糖缀合的载体蛋白。


2.根据权利要求1所述的方法，其中通过选自冻干和辐射能真空(REV)脱水的升华干燥方法制备所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物。


3.根据权利要求2所述的方法，其中所述升华干燥方法包括以饼或冻干球小珠形式冷冻所述第一水溶液和所述第二水溶液。


4.根据权利要求2所述的方法，其中所述升华干燥是在选自以下的容器中进行批量干燥：金属托盘、塑料托盘、塑料袋和I型管瓶。


5.根据权利要求1所述的方法，其中通过包括冻干或辐射能真空(REV)脱水的升华干燥方法制备所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物，其包括提供第一水溶液和第二水溶液，所述第一水溶液包含来自一种或多种肺炎链球菌血清型的活化的肺炎链球菌多糖，所述第二水溶液包含载体蛋白和缓冲剂，其中所述第一水溶液和所述第二水溶液包含约0.5％(w/v)或更多的蔗糖，并且将所述第一水溶液和所述第二水溶液经过升华干燥方法，以生产所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物。


6.根据权利要求5所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的组氨酸、琥珀酸盐、MES、MOPS、HEPES或乙酸盐缓冲剂。


7.根据权利要求5所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂。


8.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物具有小于6％的水分含量。


9.根据权利要求1所述的方法，其中所述有机溶剂是二甲基亚砜(DMSO)。


10.根据权利要求1所述的方法，其中所述重构包括八分钟或更短时间和所述混合包括120分钟或更短时间。


11.根据权利要求1所述的方法，其中每种缀合物溶液包含以重量对重量计以约0.6至约1.3的多糖与载体蛋白的比率缀合至所述载体蛋白的多糖。


12.根据权利要求1所述的方法，其中所述缀合物溶液包含小于所述溶液中总多糖的约15％的游离多糖量。


13.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种多糖是从选自以下的肺炎链球菌血清型中获得：血清型1、2、3、4、5、6A、6B、6C、6D、6E、6G、6H、7F、7A、7B、7C、8、9A、9L、9N、9V、10F、10A、10B、10C、11F、11A、11B、11C、11D、11E、12F、12A、12B、13、14、15F、15A、15B、15C、16F、16A、17F、17A,18F、18A、18B、18C、19F、19A、19B、19C、20A、20B、21、22F、22A、23F、23A、23B、24F、24A、24B、25F、25A、27、28F、28A、29、31、32F、32A、33F、33A、33B、33C、33D、33E,34、35F、35A、35B、35C、36、37、38、39、40、41F、41A、42、43、44、45、46、47F、47A、48、CWPS1、CWPS2和CWPS3。


14.根据权利要求1所述的方法，其中所述载体蛋白是选自以下的灭活的细菌类毒素：破伤风类毒素、白喉类毒素、百日咳类毒素、细菌溶细胞素或肺炎球菌溶血素。


15.根据权利要求12所述的方法，其中所述灭活的细菌类毒素是CRM197。


16.根据权利要求1所述的方法，其中所述缀合物溶液是无菌过滤的。


17.根据权利要求1所述的方法，其中通过与氧化剂反应将所述肺炎链球菌多糖活化。


18.一种制备组合物的方法，所述组合物包含两种或更多种缀合物，每种缀合物含有与载体蛋白共价连接的来自一种或多种血清型的肺炎链球菌多糖，所述方法包括：
(a)提供
(i)两种或更多种第一水溶液，每种第一水溶液包含特定肺炎链球菌血清型的活化多糖，其中所述多糖已与氧化剂反应以提供所述活化多糖，且其中所述两种或更多种第一水溶液是不同的；或
(ii)两种或更多种第一水溶液，每种第一水溶液包含两种或更多种肺炎链球菌血清型的活化多糖，其中所述多糖已与氧化剂反应以提供所述活化多糖，且其中所述两种或更多种第一水溶液是不同的；
(b)提供两种或更多种第二水溶液，每种均包含载体蛋白和缓冲剂，其中两种或更多种第二水溶液的量对应于至少所述两种或更多种第一水溶液的量；
(c)在升华干燥方法中分别干燥所述两种或更多种第一水溶液和所述两种或更多种第二水溶液以生产两种或更多种第一干燥的组合物和两种或更多种第二干燥的组合物，所述第一干燥的组合物各自包含干燥的多糖，所述第二干燥的组合物各自包含干燥的载体蛋白；
(d)在有机溶剂中分别重构每种所述两种或更多种第一干燥的组合物和每种所述两种或更多种第二干燥的组合物并混合，以提供两种或更多种第一均质溶液和两种或更多种第二均质溶液，所述第一均质溶液各自独立地包含(i)特定肺炎链球菌血清型的多糖或(ii)两种或更多种特定肺炎链球菌血清型的多糖，所述第二均质溶液各自包含所述载体蛋白；
(e)通过Tee混合分别将每种第一均质溶液与第二均质溶液组合，以生产多种混合物；
(f)向所述多种混合物中添加还原剂，以生产多种缀合物溶液；和
(g)将两种或更多种所述多种缀合物溶液组合，以生产包含两种或更多种缀合物的组合物，每种缀合物含有与载体蛋白共价连接的来自一种或多种血清型的肺炎链球菌多糖。


19.根据权利要求18所述的方法，其中通过分别将第一均质溶液与第二均质溶液Tee混合制备至少一种缀合物溶液，以生产所述多种缀合物溶液；或
其中通过分别将第一水溶液与第二均质溶液Tee混合制备至少一种缀合物溶液，以生产所述多种缀合物溶液；或
其中通过分别将第一均质溶液与第二均质溶液Tee混合制备每种缀合物溶液，以生产所述多种缀合物溶液；或
其中通过分别将第一水溶液与第二均质溶液Tee混合制备每种缀合物溶液，以生产所述多种缀合物溶液。


20.根据权利要求18所述的方法，其中所述升华干燥方法包括冻干或辐射能真空(REV)脱水。


21.根据权利要求18所述的方法，其中所述升华干燥方法包括以饼或冻干球小珠形式冷冻所述第一水溶液和所述第二水溶液。


22.根据权利要求18所述的方法，其中所述升华干燥是在选自以下的容器中进行批量干燥：金属托盘、塑料托盘、塑料袋和I型管瓶。


23.根据权利要求18所述的方法，其中所述第一水溶液和所述第二水溶液包含约0.5％(w/v)或更多蔗糖。


24.根据权利要求18所述的方法，其中所述有机溶剂是二甲基亚砜(DMSO)。


25.根据权利要求18所述的方法，其中所述重构包括八分钟或更短时间和所述混合包括120分钟或更短时间。


26.根据权利要求18所述的方法，其中每种缀合物溶液包含以重量对重量计以约0.6至约1.3的多糖与载体蛋白的比率缀合至所述载体蛋白的多糖。


27.根据权利要求18所述的方法，其中每种缀合物溶液包含小于所述溶液中总多糖的约15％的游离多糖量。


28.根据权利要求18所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的组氨酸、琥珀酸盐、MES、MOPS、HEPES或乙酸盐缓冲剂。


29.根据权利要求18所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂。


30.根据权利要求18所述的方法，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·L·阿尔，A·巴姆布哈尼，C·J·法雷尔，P·麦克休，M·C·琼斯，D·D·罗斯，J·R·西纳柯拉，J·斯坦布罗，M·P·沃森，E·温，M·A·温特斯，
申请(专利权)人：默沙东公司，
类型：发明
国别省市：美国;US