用于制备经蛋白水解处理的多肽的方法技术

本申请涉及蛋白水解活性多肽及其多种应用。

【技术实现步骤摘要】
用于制备经蛋白水解处理的多肽的方法本申请为2013年11月21日提交的，专利技术名称为“用于制备经蛋白水解处理的多肽的方法”的申请CN201380060742.7的分案申请。本专利技术涉及具有蛋白水解活性的多肽及其在筛选和制备方法中的多种应用。肉毒芽孢杆菌(Clostridiumbotulinum)和破伤风芽胞梭菌(破伤风芽胞梭菌)产生高度有力的神经毒素，即，分别是肉毒菌神经毒素(BoNT)和破伤风神经毒素(TeNT)。这些梭菌神经毒素(CNT)特异性地结合至神经元细胞，并且干扰神经递质的释放。肉毒芽胞梭菌分泌肉毒菌神经毒素(BoNT)的七种以A到G命名的差异抗原性血清型。所有血清型以及破伤风芽胞梭菌分泌的相关破伤风神经毒素(TeNT)破伤风芽胞梭菌均为阻断突触的胞吐的Zn2+-内蛋白酶，其通过切割控制细胞膜融合的SNARE复合体的形成中涉及的蛋白质来进行上述阻断。CNT造成可见于肉毒症和破伤风的弛缓性肌肉麻痹。此外，还显示CNT活性会影响腺体分泌。CNT对肌肉和腺体活性的这些生理作用，被越来越多地用于各种治疗及化妆美容应用。1989年，美国批准了肉毒菌神经毒素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.蛋白水解活性多肽在制备经蛋白水解处理的多肽中的应用，其特征在于，所述蛋白水解活性多肽是Lys-C或与其具有至少60％序列相同性的同源物；/n其中，所述经蛋白水解处理的多肽是双链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)，并且其中所述蛋白水解活性多肽水解单链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)以产生双链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)。/n

【技术特征摘要】
20121121 EP PCT/EP2012/0732831.蛋白水解活性多肽在制备经蛋白水解处理的多肽中的应用，其特征在于，所述蛋白水解活性多肽是Lys-C或与其具有至少60％序列相同性的同源物；
其中，所述经蛋白水解处理的多肽是双链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)，并且其中所述蛋白水解活性多肽水解单链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)以产生双链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述单链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)是天然产生的神经毒素、重组神经毒素或经修饰的神经毒素，例如缺乏天然Hc结构域或其部分的神经毒素或具有替代所述神经毒素Hc结构域的其它氨基酸残基的衍生物。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述单链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)包含与选自SEQIDNO:3-10中的任一条多肽序列具有至少50％的序列相同性的氨基酸序列；
优选地，其中所述蛋白水解活性的多肽在所述SEQIDNO:3-10中任一条序列中的碱性氨基酸残基的紧接C末端位置水解所述单链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)。


4.用于制备蛋白水解处理的多肽的方法，所述方法包括使如下物质(a)与(b)接触的步骤：
(a)第一多肽，所述第一多肽是Lys-C或与其具有至少60％序列相同性的同源物；
以及
(b)第二多肽，所述第二多肽易被所述第一多肽蛋白水解；
其中所述接触导致所述第二多肽被蛋白水解处理成至少两个切割产物；
其中所述第二多肽是单链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)，并且其中所述第一多肽水解所述单链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)以产生双链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)。


5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述单链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)是天然产生的神经毒素、重组神经毒素或经修饰的神经毒素，例如缺乏天然Hc结构域或其部分的神经毒素或具有替代所述神经毒素Hc结构域的其它氨基酸残基的衍生物。


6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述第二多肽包含与选自SEQIDNO:3-10中的任一条多肽序列具有至少50％的序列相同性的氨基酸序列；
优选地，其中所述第一多肽在所述SEQIDNO:3-10中任一条序列中的碱性氨基酸残基的紧接C末端位置蛋白水解切割所述第二多肽。


7.如权利要求1-3中任一项所述的应用，或如权利要求4-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述双链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)的L-链的C端和H-链的N端与分离自野生型梭菌的相应双链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)相同。


8.如权利要求1-3或7中任一项所述的应用或如权利要求4-7中任一项所述的方法，其特征在于，与由野生型梭菌中的相同单链肉毒菌神经毒素血清型A(BoNT/A)多肽产生的相应肉毒菌神经毒素双链血清型A(BoNT/A)多肽相比，所述双链梭菌神经毒素血清型A(BoNT/A)具有相同的氨基酸序列。


9.如权利要求4-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述接触在细胞中、细胞裂解物中、纯化的细胞裂解物中或对象中发生。


10.如权利要求4-9中任一项所述的方法在产物质量评估或在药物制备中的应用。


11.通过权利要求4-9中任一项所述的方法能获得的组合物；
优选地，其中所述组合物是药物组合物，其包含通过如权利要求4-9中任一项所述的方法能获得的经处理的多肽和药学上可接受的载体。


12.如权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含经处理的和未经处理的第二多肽的混合物，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·拉梅尔，
申请(专利权)人：益普生生物创新有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB