【技术实现步骤摘要】
一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白突变体及应用
：本专利技术属于基因工程和酶工程领域，具体涉及一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白突变体及应用。
技术介绍
纤维小体是一种可以组织、协调多种酶组分协同高效催化降解木质纤维素的天然多酶自组装体系，纤维小体主要由两部分组成：含有酶或其他辅助蛋白的对接蛋白(dockerin，Doc)和含有结构蛋白的粘连蛋白(cohesin，Coh)，在宽泛意义上后者又可被称为脚架蛋白。纤维小体作为一种天然、高效的多酶自组装体系，目前已在细菌、酵母等多种微生物中成功实现了胞外表面展示，并通过在Doc和Coh上利用融合酶的技术融合连接不同功能的蛋白质或酶，利用Doc和Coh相互吸引组装的原理，构建多种蛋白质或酶相互靠近的多酶复合体，缩短了物质在酶与酶之间传递的距离，进而提高了多酶串联反应的反应效率，在生物质降解、乙醇和2,3-丁二醇合成、生物传感器等多个领域实现应用[Bule,JournalofBiologicalChemistry,2016,29；Liang,Applied&Environm...
【技术保护点】
1.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白突变体，其特征在于，对接蛋白中的D
【技术特征摘要】
1.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白突变体，其特征在于，对接蛋白中的D1D/N3D/N5D/N9D12氨基酸序列中的D1位点的D突变为R，即突变为R1D/N3D/N5D/N9D12氨基酸序列。
2.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白突变体，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，进行定点突变，获得对接蛋白突变体核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；或者一种纤维小体对接蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，进行定点突变，获得对接蛋白突变体核苷酸序列如SEQIDNO.6所示。
3.一种适用于低钙离子浓度的纤维小体对接蛋白突变体，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，进行定点突变，获得对接蛋白突变体，氨基酸序列如SEQIDNO.7所示；或者一种纤维小体对接蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO4所示，进行定点突变，获得对接蛋白突变体，氨基酸序列如SEQIDNO.8所示。
4.权利要求1-3任一项所述对接蛋白突变体的制备方法，其特征在于，以上述对接蛋白中的D1D/N3D/N5D/N9D12氨基酸序列为基础，依据D1位点的D突变为R设计定点突变引物，以携带纤维小体对接蛋白基因的pET28a(+)载体为模板，进行PCR，构建重组突变质粒，并将突变质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，挑选阳性克隆进行发酵，发酵结束后收集菌体，对菌体进行破碎，纯化获得纤维小体对接蛋白突变体。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，发酵结束后离心收集菌体，对菌体进行超声破碎，经亲和色谱纯化获得纤维小体对接蛋白突变体。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，以分别连接在pET28a(+)载体NcoI和EcoRI酶切位点间的对接蛋白DocA(载体为DocA-pET28a)或DocB(载体为DocB-pET28a)为模板，进行对接蛋白突变体的引物设计，进行PCR，构建相应突变体质粒；其中对接蛋白DocA来源于热纤梭菌(Clostridiumthermocellum)xynY基因(GenBank:X83269.1)中，DocB来源于热纤梭菌(Clostridiumthermocellum)celQ基因(GenBank:AB047845.2)，DocA核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，对应突变体D-RA核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；或DocB核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；对应突变体D-RB核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；并将突变质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，挑选阳性克隆进行发酵，发酵结束后收集菌体，对菌体进行破碎，纯化获得纤维小体对接蛋白突变体；
优选的，所述制备方法中，对接蛋白DocA氨基酸序列如SEQIDNO.3所示突变为突变体D-RA，氨基酸序列如SEQIDNO.7所示；或对接...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪俊卿，李楠，薛乐，范翰，王瑞明，李丕武，姜彦君，王子睿，王大涛，包涵，刘炜杰，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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