一种活性提高的纤维小体对接蛋白突变体36741及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种活性提高的纤维小体对接蛋白突变体36741及应用，纤维小体对接蛋白突变体36741为一种纤维小体对接蛋白DocA，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，进行定点突变，获得活性提高的对接蛋白突变体36741，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；使得对接蛋白能够更高效的与黏连蛋白发生相互结合组装，在微生物的胞外多酶体系的构建过程中有着广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种活性提高的纤维小体对接蛋白突变体36741及应用
本专利技术属于基因工程和酶工程领域，具体涉及一种活性提高的纤维小体对接蛋白突变体36741及应用。
技术介绍
纤维小体是厌氧生物存在的一种纤维素酶系，是多种纤维素酶、半纤维素酶依靠锚定-粘附机制形成的一种多酶复合体结构，通过细胞粘附蛋白附着在细菌细胞壁上，分子量2.0x106～2.5x106Da，能高效彻底地降解天然纤维素材料。纤维小体主要由两部分组成：含有酶或其他辅助蛋白的对接蛋白(dockerin，Doc)和含有结构蛋白的粘连蛋白(cohesin，Coh)。纤维小体是一种细胞表面的细胞器，包含多种酶以及相关的辅助因子，这些辅助因子依靠特定的折叠亚单位与酶相连。酶分子依赖于酶亚基上的锚定域和脚手架蛋白上的粘附域，整合在纤维小体上[LytleBL,VolkmanBF,WestlerWM,etal.Secondarystructureandcalcium-inducedfoldingoftheClostridiumthermocellumdockerindomaindeterminedbyNM本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种纤维小体对接蛋白突变体36741，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白DocA，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，进行定点突变，获得活性提高的对接蛋白突变体36741，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种纤维小体对接蛋白突变体36741，其特征在于，一种纤维小体对接蛋白DocA，核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，进行定点突变，获得活性提高的对接蛋白突变体36741，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种纤维小体对接蛋白突变体36741为一种纤维小体对接蛋白DocA，氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，进行定点突变，获得活性提高的对接蛋白突变体36741，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.权利要求1-2任一项所述对接蛋白突变体36741的制备方法，其特征在与，包括如下步骤：
以上述对接蛋白中的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，进行定点突变，获得对接蛋白突变体36741，核苷酸序列如SEQIDNO.1所示为基础，设计定点突变引物，以携带纤维小体对接蛋白基因的pET28a(+)载体为模板，进行PCR，构建重组突变质粒，并将突变质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，挑选阳性克隆进行发酵，发酵结束后收集菌体，对菌体进行破碎，纯化获得纤维小体对接蛋白突变体。


4.如权利要求3所述制备方法，其特征在于，由对接蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，突变为对接蛋白突变体36741，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


5.如权利要求3所述制备方法，其特征在于，发酵结束后离心收集菌体，对菌体进行超声破碎，经亲和色谱纯化获得纤维小体对接蛋白突变体。


6.如权利要求3所述制备方法，其特征在于，对接蛋白突变体36741的PCR扩增引物核苷酸序列如下：
36741-F如SEQIDNO.7所示；
36741-R如SEQIDNO.8所示。


7.如权利要求6所述制备方法，其特征在于，PCR反应体系：
质粒载...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪俊卿，王子睿，杨翠平，范翰，王瑞明，薛乐，李楠，姜彦君，王大涛，田文卓，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37