针对家禽坏死性肠炎的疫苗制造技术

一种免疫原性多肽适用于制备供治疗或预防家禽小肠坏死用的疫苗，所述免疫原性多肽选自经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽、所述菌毛多肽的变异体；所述菌毛多肽的片段；和所述变异体的片段。所述经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽包括组装的菌毛或菌毛亚单元CnaA、FimA和/或FimB。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对家禽坏死性肠炎的疫苗
技术介绍
本申请案涉及适用于制备针对家禽坏死性肠炎的疫苗的多肽。更具体地说，本申请涉及一种产气荚膜梭菌菌毛多肽，其适用于制备针对与家禽的产气荚膜梭菌感染有关的坏死性肠炎的疫苗。坏死性肠炎是家禽(例如肉用仔鸡)的一种肠疾病，估计2015年其使家禽产业损失花费$US60亿。坏死性肠炎主要由产气荚膜梭菌的某些A型菌株引起，所述A型菌株产生NetB成孔毒素，其过度生长且粘附于肠粘膜，最终产生疾病的特征性损伤。产气荚膜梭菌是肠道的正常习居菌，并且典型地，只有携载NetB毒素的那些菌株才能够引起坏死性肠炎。坏死性肠炎主要通过投与饲料内的抗生素来控制，这种做法因抗微生物抗性的潜在扩散而越来越不受欢迎，并且有些国家当前正逐步停止生产饲料内的抗生素。因此，从财务和公共健康的视角来看，重要的是找到控制坏死性肠炎的替代方法，例如疫苗的研发。最近已通过产气荚膜梭菌粘附基因座与NetB阳性菌株的关系鉴定出产气荚膜梭菌粘附基因座(VR-10B)(乐普D(LeppD)，龚J(GongJ)，松尔JG(SongerJG)，伯尔宁P(BoerlinP)，帕莱拉VR(ParreiraVR)，普瑞斯考JF(PrescottJF.)，2013，携载netB质粒的家禽产气荚膜梭菌分离株中的附属基因组区域的鉴定(IdentificationofAccessoryGenomeRegionsinPoultryClostridiumperfringensIsolatesCarryingthenetBPlasmid)，细菌学杂志(JournalofBacteriology)195:1152-1166)。在所检查的54种家禽分离株中，发现87％的netB阳性分离株和42％的netB阴性分离株存在经鉴定的基因座。这种基因座(后来重新命名为胶原蛋白粘附(CA)基因座)后来显示与胶原蛋白结合有关，并且是坏死性肠炎发病机理所必需的(韦德B(WadeB)，凯伯恩AL(KeyburnAL)，哈瑞恩V(HaringV)，福特M(FordM)，路德JI(RoodJI)，穆尔RJ(MooreRJ)：产气荚膜梭菌菌株的粘附能力是禽类坏死性肠炎发病机理的关键(TheadherentabilitiesofClostridiumperfringensstrainsarecriticalforthepathogenesisofaviannecroticenteritis)，兽医微生物学(VetMicrobiol)2016,197:53-61；韦德B，凯伯恩AL，希曼T(SeemannT)，路德JI，穆尔RJ：产气荚膜梭菌对胶原蛋白的结合与引起鸡发生坏死性肠炎的能力相关(BindingofClostridiumperfringenstocollagencorrelateswiththeabilitytocausenecroticenteritisinchickens)，兽医微生物学2015,180:299-303)。多种产气荚膜梭菌蛋白质此前已作为候选疫苗加以评估。然而，这些蛋白质对坏死性肠炎最多提供部分的防护作用。另外，这些蛋白质中有许多对引起坏死性肠炎的菌株无特异性，并且不知道能否对坏死性肠炎发病机理起作用。因此，希望鉴定出替代的产气荚膜梭菌多肽，其可以作为用于生产针对坏死性肠炎的疫苗的候选物。
技术实现思路
本专利技术的一个方面提供一种经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽。在另一个方面中，本专利技术提供一种免疫原性多肽，其选自经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽、菌毛多肽的变异体；菌毛多肽的片段；和所述变异体的片段，其中菌毛多肽、变异体、多肽的片段和变异体的片段在家禽中具有免疫原性。在至少一个实施例中，菌毛多肽是CnaA多肽。在至少一个实施例中，菌毛多肽是FimA多肽。在至少一个实施例中，菌毛多肽是FimB多肽。在至少一个实施例中，菌毛多肽是组装的菌毛。本专利技术的另一方面提供一种多核苷酸，其包含编码如本文所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽或免疫原性多肽的序列。在另一个方面中，本申请提供一种包含多核苷酸的载体，所述多核苷酸具有编码如本文所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽或免疫原性多肽的序列，其中载体被配置成在宿主细胞中表达经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽或免疫原性多肽。在另一个方面中，本专利技术提供一种用于治疗或预防家禽坏死性肠炎的疫苗，其中疫苗包含如本文所述的免疫原性多肽。在另一个方面中，本申请提供一种用于治疗或预防家禽的产气荚膜梭菌感染的疫苗，其中疫苗包含如本文所述的免疫原性多肽。在另一个方面中，本专利技术提供如本文所述的免疫原性多肽的用途，其用于制备供治疗或预防家禽坏死性肠炎或治疗或预防家禽的产气荚膜梭菌感染的药剂。在另一个方面中，本专利技术提供一种治疗或预防家禽坏死性肠炎或治疗或预防家禽的产气荚膜梭菌感染的方法，所述方法包含向家禽投与有效量的如本文所述的免疫原性多肽或其疫苗。在另一个方面中，本专利技术提供如本文所述的免疫原性多肽用作疫苗的用途，所述疫苗用于治疗或预防家禽坏死性肠炎或治疗或预防家禽的产气荚膜梭菌感染。本专利技术的另一个方面提供一种选择性结合到如本文所述的免疫原性多肽的抗体。在另一个方面中，本专利技术提供一种检测家禽的产气荚膜梭菌感染的方法，其通过从家禽获得生物样品并且在所述生物样品中检测选择性结合到如本文所述的免疫原性多肽的抗体的存在来进行。本专利技术的又一个方面提供一种检测如本文所述的免疫原性多肽的方法，包含使所述免疫原性多肽暴露于选择性结合到所述免疫原性多肽的抗体以及检测所述免疫原性多肽对所述抗体的结合。附图说明本专利技术的其它特征将因以下书面描述和附图而变得显而易见，其中：图1是5.2千碱基对产气荚膜梭菌VR-10B染色体基因座的图示；图2A是一张照片，其示出了通过库马斯染色(Coomassiestaining)目测到十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)使组胺酸标记的重组菌毛亚单元多肽CnaA发生分离；图2B是一张照片，其示出了通过库马斯染色目测到SDS-PAGE使重组的菌毛亚单元多肽FimA发生分离；图2C是一张照片，其示出了通过库马斯染色目测到SDS-PAGE使重组的菌毛亚单元多肽FimB发生分离；图2D是一张照片，其示出了在浓缩和脱盐之后，通过SDS-PAGE和库马斯染色目测到CnaA、FimA和FimB的混合洗脱份；图3A是一个图形，其示出了在第一疫苗接种试验中，经单独佐剂免疫或经CnaA免疫的鸡的针对CnaA重组多肽的血清IgY抗体反应(405nm吸光度)。每个点表示单一个体并且水平线表示平均值。通过杜凯氏检验(Tukey'stest)(杜凯J.(Tukey,J)，“通过方差分析比较个体平均值(ComparingIndividualMeansintheAnalysisofVariance)”，生物测量学(Biometrics)(1949)5(2):99-114)测量时，*表示每组中的免疫前样本(d8)在p<0.05水平时的显著差异；**表示p<0.01水平时的显著差本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170531 US 62/513,0011.一种经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽。


2.根据权利要求1所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽，其中所述菌毛多肽是CnaA多肽。


3.根据权利要求2所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽，其中所述CnaA多肽选自：具有选自SEQIDNO:10和SEQIDNO:13的氨基酸序列的多肽；由具有选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:4和SEQIDNO:7的核苷酸序列的多核苷酸编码的多肽；和由在至少中度严格条件下与具有选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:4和SEQIDNO:7的序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽。


4.根据权利要求1所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽，其中所述菌毛多肽是FimA多肽。


5.根据权利要求4所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽，其中所述FimA多肽选自：具有选自SEQIDNO:11和SEQIDNO:14的氨基酸序列的多肽；由具有选自SEQIDNO:2、SEQIDNO:5和SEQIDNO:8的核苷酸序列的多核苷酸编码的多肽；和由在至少中度严格条件下与具有选自SEQIDNO:2、SEQIDNO:5和SEQIDNO:8的序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽。


6.根据权利要求1所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽，其中所述菌毛多肽是FimB多肽。


7.根据权利要求6所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽，其中所述FimB多肽选自：具有选自SEQIDNO:12和SEQIDNO:15的氨基酸序列的多肽；由具有选自SEQIDNO:3、SEQIDNO:6和SEQIDNO:9的核苷酸序列的多核苷酸编码的多肽；和由在至少中度严格条件下与具有选自SEQIDNO:3、SEQIDNO:6和SEQIDNO:9的序列的多核苷酸杂交的多核苷酸编码的多肽。


8.根据权利要求1所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽，其中所述菌毛多肽是经组装的菌毛。


9.根据权利要求9所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽，其中所述经组装的菌毛包含一或多个亚单元，所述亚单元各自个别地选自CnaA多肽、FimA多肽和FimB多肽。


10.一种免疫原性多肽，其选自根据权利要求1到9中任一权利要求所述的经分离的产气荚膜梭菌菌毛多肽、所述菌毛多肽的变异体；所述菌毛多肽的...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚建华，D·莱普，
申请(专利权)人：由加拿大农业与农产品部长代表的加拿大女王陛下，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA