产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白及其制备方法、应用和疫苗技术

本发明专利技术提供了一种产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白及其制备方法、应用和疫苗，涉及生物制品领域。该产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白包括：将氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的野生型产气荚膜梭菌β毒素的第212位精氨酸和266位酪氨酸突变为丙氨酸，该产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白相比于野生型产气荚膜梭菌β毒素的毒性显著降低，同时还保留了良好的免疫原性。

【技术实现步骤摘要】
产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白及其制备方法、应用和疫苗
本专利技术涉及生物制品领域，尤其是涉及一种产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白及其制备方法、应用和疫苗。
技术介绍
产气荚膜梭菌(ClostridiumPerfringens)也称产气荚膜杆菌或魏氏梭菌，是临床上气性坏疽病原菌中最多见的一种梭菌，能分解肌肉和结缔组织中的糖，产生大量气体，导致组织严重气肿，继而影响血液供应，造成组织大面积坏死。产气荚膜梭菌也是羊快疫、羔羊痢疾、牛羊坏死性肠炎、牛羊肠毒血症的主要病原之一，对畜牧业造成了巨大的经济损失。产气荚膜梭菌主要的致病因素是其分泌的外毒素。根据产生4种主要致死性外毒素α、β、ε、ι的种类，将该菌分为A、B、C、D、E五个毒素型。B、C型产气荚膜梭菌分泌β毒素，该毒素是主要的免疫原，能够刺激机体产生中和性抗体。因此，β毒素是预防C型产气荚膜梭菌感染疫苗的主要抗原。目前制备β毒素疫苗，有两种方法。一种是使用C型产气荚膜梭菌接种到厌气肉肝汤中厌氧培养24h，粗提β毒素，测定毒力，然后加入甲醛灭活，再按照一定比例与氢氧化铝佐剂混合制成。由于制备过程本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白，其特征在于，包括：将氨基酸序列如SEQ IDNO.3所示的野生型产气荚膜梭菌β毒素的第212位精氨酸和266位酪氨酸突变为丙氨酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白，其特征在于，包括：将氨基酸序列如SEQIDNO.3所示的野生型产气荚膜梭菌β毒素的第212位精氨酸和266位酪氨酸突变为丙氨酸。


2.根据权利要求1所述的产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白，其特征在于，所述产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白的氨基酸序列含有如SEQIDNO.1所示序列；
优选地，所述产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示或如SEQIDNO.2所示。


3.根据权利要求1或2所述的产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白，其特征在于，所述产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白由革兰氏阳性菌表达系统表达。


4.核酸，其特征在于，含有编码权利要求1-3任一项所述的产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白的区域；
优选地，所述核酸的核苷酸序列含有如SEQIDNO.4所示序列；
优选地，所述核酸的核苷酸序列如SEQIDNO.4或SEQIDNO.5所示。


5.权利要求1-3任一项所述的产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白的制备方法，其特征在于，包括在革兰氏阳性菌表达系统中表达编码所述产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白的基因；
优选地，所述革兰氏阳性菌表达系统包括(c1)～(c3)中的任意一种；
(c1)葡萄球菌表达系统；
(c2)枯草芽孢杆菌表达系统；
(c3)谷氨酸棒状杆菌表达系统。


6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，包括将含有编码所述产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白的基因克隆至载体，得到重组载体；然后将重组载体转化至大肠杆菌，筛选后将重组载体阳性克隆经金黄色葡萄球菌RN4220转化，将重组载体转化进入表皮葡萄球菌中，然后经诱导表达得到所述产气荚膜梭菌β毒素突变体蛋白；
优选地，所述载体包括pYL质粒载体，所述pYL质粒载体是将Xyl/tet片段、ori区域和Erm抗性基因插入pRB373质粒的多克隆位点及抗性区域中，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，王钢，候凤，张慧敏，周涛，刘强德，鲍子磊，张艳盟，姜峰，
申请(专利权)人：天康生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65