【技术实现步骤摘要】
一种产气荚膜梭菌α毒素突变体、表达系统、制备方法及应用
本专利技术涉及生物疫苗
，具体而言，涉及一种产气荚膜梭菌α毒素突变体、表达系统、制备方法及应用。
技术介绍
产气荚膜梭菌种类众多，均能够产生α毒素，且α毒素是产气荚膜梭菌主要的毒力因子，是产气荚膜梭菌的主要免疫原，能够引起机体的免疫反应。因此，α毒素是制备产气荚膜梭菌感染疫苗过程中应用的主要抗原。同时，由于在众多产气荚膜梭菌中，A型产气荚膜梭菌分泌α毒素最多，因此，选用A型产气荚膜梭菌对α毒素的研究最多。目前α毒素疫苗有两种制备方法，分别是传统菌苗和基因工程亚单位菌苗。其中传统菌苗具体的为，将A型产气荚膜梭菌于厌气肉肝汤中培养24h后的培养液，提取并测定α毒素毒力后，加入甲醛灭活，再按照一定比例的配比与氢氧化铝佐剂混合制成。由于厌氧肝汤培养基成分复杂，难以进行质量控制，使得批间差异巨大，杂蛋白众多；在毒素定量过程中，无法进行除小鼠毒力试验以外的测定方法，既不方便也不准确；在毒素灭活过程中，由于α毒素毒力强，所需使用的甲醛含量高，使得灭活时间非常久；更重要的...
【技术保护点】
1.一种产气荚膜梭菌α毒素突变体，其特征在于，与野生型产气荚膜梭菌α毒素氨基酸序列相比，所述的产气荚膜梭菌α毒素突变体第56位的天冬氨酸突变为丙氨酸，共370个氨基酸残基，所述野生型产气荚膜梭菌α毒素氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种产气荚膜梭菌α毒素突变体，其特征在于，与野生型产气荚膜梭菌α毒素氨基酸序列相比，所述的产气荚膜梭菌α毒素突变体第56位的天冬氨酸突变为丙氨酸，共370个氨基酸残基，所述野生型产气荚膜梭菌α毒素氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。
2.一种核酸，其特征在于，含有编码权利要求1所述产气荚膜梭菌α毒素突变体的核苷酸序列；
所述编码权利要求1所述产气荚膜梭菌α毒素突变体的核苷酸序列优选为序列SEQIDNo.3。
3.一种产气荚膜梭菌α毒素突变体的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括质粒载体，所述质粒载体上包括有权利要求2所述的核苷酸序列；
优选地，所述核苷酸序列包括核苷酸序列SEQIDNo.3；
优选地，所述质粒载体包括以pRB373质粒为基础构建的重组质粒pYL；
进一步优选地，所述重组质粒pYL包括Xyl/tet片段、ori区域及Erm抗性基因；
进一步优选地，所述重组质粒pYL还包括复制子pUC18和pE194。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体中核苷酸序列SEQIDNo.3上游还包括信号肽的核苷酸序列SEQIDNo.6。
5.一种产气荚膜梭菌α毒素突变体的表达系统，其特征在于，所述表达系统包括含有权利要求3或4所述表达载体的革兰氏阳性菌表达系统。
6.根据权利要求5所述的表达系统，其特征在于，所述的革兰氏阳性菌表达系统包括葡萄球菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统或谷氨酸棒状杆菌表达系统中的一种；
优选地，所述的葡萄球菌表达系统包括表皮葡萄球菌表达系统。
7.一种产气荚膜梭菌α毒素突变体的表达系统的制备方法，其特征在于，包括步骤：将权利要求2所述产气荚膜梭菌α毒素突变体的核苷酸序列整合到质粒载体上形成表达载体，而后将表达载体转化进革兰氏阳性菌中，得到革兰氏阳性菌表达系统；
优选地，所述质粒载体包括以pRB373质粒为基础构建的重组质粒pYL；
优选地，所述重组质粒pYL包括保证表达载体在转化细菌中正常复制的复制子、ori区域、用于表达调控的序列和用于筛选的序列；
优选地，所述复制子包括pUC18和pE194；
优选地，所述用于表达调控的序列包括Xyl/tet片段；
优选地，所述用于筛选的序列包括Erm抗性基因；
优选地，所述产气荚膜梭菌α毒素突变体的核苷酸序列包括核苷酸序列SEQIDNo.3；
优选地，所述表达载体中核苷酸序列SEQIDNo.3上游还包括信...
【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，王钢，唐慧芬，刘强德，何海，霍新亮，孙彦军，任立松，
申请(专利权)人：天康生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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