一种C反应蛋白检测试剂盒制造技术

本发明专利技术实施例公开了一种C反应蛋白检测试剂盒，所述C反应蛋白检测试剂盒包括第一试剂和第二试剂；其中，所述第一试剂包括能够吸附C反应蛋白的微球体，所述第二试剂包括CRP抗体和白蛋白(Alb)。该试剂盒用以解决现有用于普通免疫比浊法的CRP检测试剂盒灵敏度低，检测低值样本出现0值的问题。本发明专利技术的C反应蛋白检测试剂盒既可以检测低值样本中的CRP含量，又可以检测高值样本中的CRP含量，试剂盒检测的灵敏度高，准确度高；同时该方案可以使用普通免疫比浊法的抗人C反应蛋白抗血清和少量微球，避免了胶乳比浊试剂配制过程中繁琐的偶联步骤，从而降低了试剂盒的成本，提高了市场的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种C反应蛋白检测试剂盒
本专利技术涉及生化检测
，具体涉及一种C反应蛋白检测试剂盒。
技术介绍
C反应蛋白(C-reactiveprotein，CRP)是一种急性时相蛋白，在各种急性和慢性感染、组织损伤、恶性肿瘤、心肌梗死、手术刨伤、放射线损伤等时，CRP可迅速升高，病情好转时又迅速降至正常。为了测定CRP，目前主要采用免疫化学法，如单向免疫扩散、火箭免疫电泳、胶乳法、免疫速率散射比浊法和ELISA等。其原理都是利用特异性抗CRP抗体与待检标本中CRP反应，根据形成的沉淀环直径、沉淀峰高度、凝集程度、呈色程度或其他免疫反应结果判定待测标本阳性、阴性或CRP含量。普通免疫比浊法、胶乳免疫比浊法及化学发光磁微粒法为目前临床实验室常用的检测方法，但胶乳免疫比浊法及化学发光磁微粒法由于工艺复杂，原料成本高，价格比较贵；普通免疫比浊法因为成本较低，使用方便，临床上应用较为广泛。普通免疫比浊法使用CRP检测试剂盒进行样品检测，检测原理为依靠抗原抗体形成的免疫复合物的浊度来定量。目前的CRP检测试剂盒在检测CRP浓度较低的样本时，因为其灵敏度较低，反应度较小而往往会出现0值。在临床检验报告中出现0值，会对临床医生作出正确判断带来不利影响和不便。
技术实现思路
本专利技术实施例的目的在于提出一种新型C反应蛋白检测试剂盒，用以解决现有用于普通免疫比浊法的CRP检测试剂盒灵敏度低，检测低值样本出现0值的问题。本专利技术的C反应蛋白检测试剂盒既可以检测低值样本中的CRP含量，又可以检测高值样本中的CRP含量，试剂盒检测的灵敏度高，准确度高；同时该专利技术方案可以使用抗人C反应蛋白多抗抗体，从而降低了试剂盒的成本，提高了市场的应用价值。为实现上述目的，本专利技术实施例提供一种C反应蛋白检测试剂盒，所述C反应蛋白检测试剂盒包括第一试剂和第二试剂；其中，所述第一试剂包括能够吸附C反应蛋白的微球体，所述第二试剂包括CRP抗体和白蛋白(Alb)。进一步的，所述微球体为聚苯乙烯微球体，平均粒径为100-150nm，优选110-140nm，更优选120-130nm。进一步的，所述CRP抗体为抗人CRP单克隆抗体或抗人CRP多克隆抗体；所述白蛋白为牛血清白蛋白(BSA)。在一个优选实施方案中，所述CRP抗体为兔抗人CRP多克隆抗体。该兔抗人CRP多克隆抗体可由人CRP的融合蛋白免疫兔子获得。进一步的，所述第一试剂采用mops(3-吗啉丙磺酸)缓冲液，所述第二试剂采用Tris(三羟甲基氨基甲烷)缓冲液。进一步的，所述第一试剂包括下列成分：45-55mmol/L3-吗啉丙磺酸(mops)、0.03-0.08wt％微球体、1.8-2.3wt％PEG6000、4.5-5.5wt％蔗糖以及0.08-0.12wt％叠氮钠；所述第一试剂的pH为7.0。作为一个优选方案，所述第一试剂包括下列成分：50mmol/L3-吗啉丙磺酸、0.05wt％聚苯乙烯微球体、2wt％PEG6000、5wt％蔗糖以及0.1wt％叠氮钠。进一步的，所述第二试剂包括下列成分：8-12mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)、5-20wt％CRP抗体、2-3wt％白蛋白、95-108mmol/L氯化钠以及0.08-0.12wt％叠氮钠；所述第二试剂的pH为7.5。作为一个优选方案，所述第二试剂包括下列成分：10mmol/L三羟甲基氨基甲烷、15wt％抗人CRP多克隆抗体、2.5wt％牛血清白蛋白、100mmol/L氯化钠以及0.1wt％叠氮钠。作为一个优选方案，所述第一试剂和所述第二试剂的体积比为2.5:1至4:1，优选3:1。本专利技术技术方案所提供的C反应蛋白检测试剂盒可配合现有生化分析仪使用，其检测原理如下：试剂盒的第一试剂中含有一定量的物理吸附微球，与待测样本混合后，待测样本中的CRP作为抗原可与微球进行吸附结合，孵育一定时间后，加入含有CRP抗体的第二试剂，抗体与微球上吸附的抗原结合，微球参与交联形成抗原-抗体免疫复合物，在例如特定的340nm处测定其浊度，根据建立的浓度-吸光度标准曲线，即可测出样本中CRP的浓度。因为物理吸附微球作为载体参与反应，最终形成的免疫复合物的浊度会明显增强，提高了检测灵敏度。同时，由于第一试剂中加入的物理微球会增大试剂的空白，本专利技术还通过在第二试剂中添加一定量的白蛋白来增加第二试剂的本底吸光度，即使空白吸光度高，在进行相应的扣除后，试剂的反应度依然很高。本专利技术实施例具有如下优点：1、本专利技术技术方案是一种新型C反应蛋白普通免疫比浊法检测试剂盒，该试剂盒灵敏度高，准确度高，既可以测出低值样本中的CRP含量，又可以测定高值样本中的CRP含量；2、通过在第一试剂中添加微球，增加试剂灵敏度，降低0值率；通过在第二试剂中添加Alb，来抵消第一试剂中添加微球造成的试剂空白的升高；3、本专利技术C反应蛋白检测试剂盒的成本低于磁微粒发光检测试剂盒及胶乳免疫比浊法检测试剂盒，具有更大的市场潜力。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本专利技术所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本专利技术所揭示的
技术实现思路
得能涵盖的范围内。图1为本专利技术实施例提供的通过使用本专利技术的C反应蛋白检测试剂盒所获得的试剂定标反应图。具体实施方式以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本实施例中提供了一种C反应蛋白检测试剂盒，所述试剂盒包括第一试剂和第二试剂；其中，所述第一试剂包括下列成分：50mmol/L3-吗啉丙磺酸、0.05wt％聚苯乙烯微球体(平均粒径为120nm)、2wt％PEG6000、5wt％蔗糖以及0.1wt％叠氮钠；所述第一试剂的pH为7.0；以及所述第二试剂包括下列成分：10mmol/L三羟甲基氨基甲烷、15wt％兔抗人CRP多克隆抗体、2.5wt％牛血清白蛋白、100mmol/L氯化钠以及0.1wt％叠氮钠；所述第二试剂的pH为7.5。所述第一试剂和所述第二试剂的体积比为3:1。实施例2将实施例1获得的C反应蛋白检测试剂盒，在日立全自动7180生化分析仪上进行性能验证。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述C反应蛋白检测试剂盒包括第一试剂和第二试剂；其中，所述第一试剂包括能够吸附C反应蛋白的微球体，所述第二试剂包括CRP抗体和白蛋白(Alb)。/n

【技术特征摘要】
1.一种C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述C反应蛋白检测试剂盒包括第一试剂和第二试剂；其中，所述第一试剂包括能够吸附C反应蛋白的微球体，所述第二试剂包括CRP抗体和白蛋白(Alb)。


2.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述微球体为聚苯乙烯微球体，平均粒径为100-150nm。


3.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述CRP抗体为抗人CRP单克隆抗体或抗人CRP多克隆抗体；所述白蛋白为牛血清白蛋白(BSA)。


4.根据权利要求3所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述CRP抗体为兔抗人CRP多克隆抗体。


5.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂采用mops缓冲液，所述第二试剂采用Tris缓冲液。


6.根据权利要求1所述的C反应蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂包括下列成分：45-55mmol/L3-吗啉丙磺酸、0.03-0.08wt％微球体、1.8-2.3wt％PEG6000、4.5-...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨烁，石怀兴，温志国，
申请(专利权)人：海丰生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11