蛋白质的定性分析制造技术

本发明专利技术涉及一种定性分析样品蛋白质的方法，所述方法包括的步骤为提供包含结合的蛋白酶的水溶胀凝胶柱床和在缓冲液中的样品蛋白质，通过将样品蛋白质与凝胶床接触而消化成多肽，并且将多肽进行质谱分析(MS)。有利地，所述方法使用包括两次或更多次重复的样品蛋白质的来回往复流动而进行，并且可在小于约37℃的温度下，例如小于约30℃的温度下进行。本发明专利技术还包括一种自动化方法以及一种装置和试剂盒，用于以比现有技术更高的速度对蛋白质进行基于质量的分析，同时保持可耐受蛋白酶的条件。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蛋白质的定性分析
本专利技术涉及蛋白质的表征和分析，特别涉及使用蛋白酶将样品蛋白质酶促裂解成其复合肽。本专利技术的方法有效地提供在可耐受所用试剂的条件下对蛋白质的鉴定。此外，本专利技术还包括基于并利用本文中所述的酶促裂解的自动化方法、装置和试剂盒。
技术介绍
通过质谱法的蛋白质的表征、鉴定和分析可以通过将蛋白质酶促裂解成其复合肽或多肽而实现。可以通过离子配对色谱法分离多肽，并将其导入质谱仪仪器中。使用基于计算机的软件，将多肽片段的质量信息用于“重组”原始蛋白质以鉴定该蛋白质。在一些情况下，可以通过质谱法直接分析蛋白质，但是在许多情况下，蛋白质过大并且必须分解成用于鉴定的组分。蛋白酶通常用于此目的。蛋白酶是一种通过切割蛋白质和(多)肽的肽键来进行蛋白水解作用的酶。胰蛋白酶是用于切割蛋白质的最常见的蛋白酶之一，是一种存在于许多脊椎动物的消化系统中的丝氨酸蛋白酶。胰蛋白酶主要在氨基酸(赖氨酸或精氨酸)的羧基侧切割肽链，除非在赖氨酸或精氨酸后紧随的是氨基酸脯氨酸。切割蛋白质的其他蛋白酶包括Glu-C、Lys-N、Lys-C、Asp-N、Arg-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于定性分析样品蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤：/na)提供水溶胀凝胶柱床，其包含至少一种结合的蛋白酶；提供至少一种在液体缓冲液中的样品蛋白质；/nb)将所述样品蛋白质通过与步骤a)的凝胶床接触进行消化，以将一种或多种蛋白质裂解成多肽；和/nc)将步骤c)中获得的多肽进行质谱分析(MS)，以获得与其相关的质量信息，/n其中步骤c)包括在小于约37℃的温度下来回往复流动。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180430 US 62/664,8811.一种用于定性分析样品蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供水溶胀凝胶柱床，其包含至少一种结合的蛋白酶；提供至少一种在液体缓冲液中的样品蛋白质；
b)将所述样品蛋白质通过与步骤a)的凝胶床接触进行消化，以将一种或多种蛋白质裂解成多肽；和
c)将步骤c)中获得的多肽进行质谱分析(MS)，以获得与其相关的质量信息，
其中步骤c)包括在小于约37℃的温度下来回往复流动。


2.根据权利要求1的方法，其中在至少步骤c)中，温度小于约30℃。


3.根据权利要求1或2的方法，其中在步骤c)中，将所述样品蛋白质来回往复地穿过凝胶床至少两次，例如4至6次。


4.根据前述权利要求中任一项的方法，其中步骤c)的持续时间小于约4小时。


5.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述至少一种结合的蛋白酶选自胰蛋白酶、Glu-C、Lys-N、Lys-C、Asp-N、Arg-C和胰凝乳蛋白酶。


6.根据前述权利要求中任一项的方法，其中在步骤d)中，鉴定的多肽的数量大于50％。


7.根据前述权利要求中任一项的方法，其中在步骤d)中，将质量信息通过基于计算机的软件来使用以确定步骤b)的所述样品蛋白质的特征。


8.根据前述权利要求中任一项的方法，其中在步骤d)中，鉴定的多肽的数量大于50％。


9.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所提供的柱的床体积范围为约5μL至约20μL床，并且能够处理最高达约150μg样品蛋白质。


10.根据前述权利要求中任一项的方法，其中在步骤b)中，提供在室温下于变性缓冲液中的蛋白质。


11.根据前述权利要求中任一项的方法，其中在步骤b)中，变性剂选自乙腈、尿素和盐酸胍。


12.一种用于将蛋白质裂解成多肽并回收多肽产物的自动化方法，所述方法包括：
a)提供一种包括多个水溶胀凝胶柱床的机器人液体处理器，每个凝胶柱床包含至少一种选自以下的结合的蛋白酶：胰蛋白酶、Glu-C、Lys-N、Lys-C、Asp-N、Arg-C和胰凝乳蛋白酶；
b)提供至少一种在液体缓冲液中的任选变性的蛋白质；
c)使蛋白质与步骤a)的凝胶床接触，每...

【专利技术属性】
技术研发人员：李·黄，徐東瑩，道格拉斯·T·杰尔德，
申请(专利权)人：百特基公司，李·黄，徐東瑩，道格拉斯·T·杰尔德，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE