基于DNA walker和G-四链体-血红素DNA酶检测EB病毒的序列组合和方法技术

本发明专利技术提供了基于DNA walker和G‑四链体‑血红素DNA酶检测EB病毒的序列组合和方法，属于基因工程技术领域，包括DNA步行者探针、轨道分子、保护序列、序列1和序列2，核苷酸依次如SEQ ID No.1～5所示。采用本发明专利技术提供的序列组合和方法实现了待测物中低浓度EB病毒DNA的检测，提高了检测的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
基于DNAwalker和G-四链体-血红素DNA酶检测EB病毒的序列组合和方法
本专利技术属于基因工程
，尤其涉及基于DNAwalker和G-四链体-血红素DNA酶检测EB病毒的序列组合和方法。
技术介绍
循环肿瘤DNA(ctDNA)，是循环血中游离于细胞外的部分降解了的机体内源性核酸，是由于肿瘤细胞增生活跃时的自动释放、肿瘤细胞凋亡、坏死等原因进入血液，并可用于肿瘤的无创诊断。ctDNA在血液中浓度低且存在高水平的正常循环DNA的干扰，因此建立特异性高、快速、高灵敏ctDNA检测方法是一个很有挑战性的工作。为此，开发了具有信号扩增能力的各种策略，包括滚环扩增、链置换扩增、环介导等温扩增、荧光定量PCR等。这些方法多为单重信号放大技术，难以实现超高灵敏循环核酸的检测，难以对肿瘤早期进行有效预测，同时这些方法扩增目标核酸需要蛋白酶(如DNA聚合酶)的参与，然而蛋白质酶易受实验条件(温度、pH和离子浓度)的影响，容易导致检测重现性和准确性差，另外还存在检测成本高、实验过程繁琐、需要昂贵的仪器设备等缺陷，而且标记荧光团的不完全猝灭可能导本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于DNA walker和G-四链体-血红素DNA酶检测EB病毒的序列组合，包括DNA步行者探针、轨道分子、保护序列、序列1和序列2；/n所述DNA步行者探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；/n所述轨道分子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；/n所述保护序列的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；/n所述序列1的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；/n所述序列2的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。/n

【技术特征摘要】
1.基于DNAwalker和G-四链体-血红素DNA酶检测EB病毒的序列组合，包括DNA步行者探针、轨道分子、保护序列、序列1和序列2；
所述DNA步行者探针的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；
所述轨道分子的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；
所述保护序列的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示；
所述序列1的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示；
所述序列2的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示。


2.一种非诊断目的地基于权利要求1所述的序列组合检测EB病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将所述DNA步行者探针和保护序列在95℃下处理5min、冷却，得到互补序列；
2)将所述轨道分子在95℃下处理5min、冷却，得到发夹结构；
3)将所述步骤1)得到的互补序列和步骤2)得到的发夹结构固定在微球上、封闭，得到固定有互补序列和发夹结构的微球；
4)将所述序列1固定在微球上、封闭，得到固定有序列1的微球；将所述序列2固定在微球上、封闭，得到固定有序列2的微球；
5)将所述步骤3)得到的固定有互补序列和发夹结构的微球与待测样品进行反应，得到反应物，将所述反应物离心，得到上清液；
6)将所述步骤4)得到的固定有序列1的微球与步骤5)得到的上清液杂交，得到杂交物；将所述步骤4)得到的固定有序列2的微球与CutsmartBuffer混合，得到混合物；将所述杂交物和混合物混合后进行孵育、离心，得到上清液；
7)将所述步骤6)得到的上清液与ABTS、双氧水混合后进行反应，在420nm处测量吸光度值，定义ΔA420nm＝A420nm-A0，其中A420nm为待测样品的吸光度值，A0为EB病毒DNA浓度为0时的吸光度值，将得到的ΔA420...

【专利技术属性】
技术研发人员：张何，傅昕，周秋香，乌玉芳，邹婷，
申请(专利权)人：湖南工程学院，
类型：发明
国别省市：湖南;43