检测冠状病毒的组合物、试剂盒和方法技术

本发明专利技术提出了一种检测冠状病毒的组合物，该组合物包括Seq ID:1和Seq ID:2所示序列和/或Seq ID:3和Seq ID:4所示序列，其中，该组合物还可以包含Seq ID:5和Seq ID:6所示序列。利用本发明专利技术提供的组合物可以对新冠状病毒的ORF1ab基因和/或N基因进行有效扩增和荧光定量PCR检测，检测步骤简单、降低了污染风险，能够快速、高效、准确的检出目的基因。本发明专利技术还提供了检测冠状病毒的试剂盒及用于非诊断目的的检测冠状病毒的方法，该方法具有良好的稳定性、灵敏度及特异性。

【技术实现步骤摘要】
检测冠状病毒的组合物、试剂盒和方法
本专利技术涉及生物
，具体地，本专利技术涉及检测冠状病毒的组合物、试剂盒和用于非诊断目的的检测冠状病毒的方法。
技术介绍
冠状病毒为不分节段的单股正链RNA病毒，属于巢病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)正冠状病毒亚科(Orthocoronavirinae)，根据血清型和基因组特点冠状病毒亚科被分为α、β、γ和δ四个属，可以感染许多动物物种，包括人、蝙蝠、狗、猪、老鼠、鸟、牛、鲸、马、山羊、猴子等。已知感染人的冠状病毒有6种，包括α属的229E和NL63，β属的OC43和HKU1、中东呼吸综合征相关冠状病毒(MERSr-CoV)和严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(SARSr-CoV)。2019爆发的新型冠状病毒属于β属的新型冠状病毒。新型冠状病毒引起的新冠肺炎常见体征有发热、咳嗽、气促和呼吸困难等呼吸道症状。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，进一步导致死亡。目前对于2019新型冠状病毒所致疾病没有特异治疗方法，但许多症状可以对症进行辅助护理和支持性治疗。针对该病毒导致的临床疾病，迫切需要开发灵敏、快速、特异、稳定和便于使用的诊断方法，第一时间提供准确、特异性的快速检测探针引物，对于该疾病的防控极为重要，在临床应用中能够为明确病原、早期诊断提供依据，促进早期合理治疗，减少经验性抗生素使用增加的耐药负担，及时控制病情。荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程。随着PCR反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模板的量。当在荧光定量PCR检测系统中引入内参基因，其同时与目的基因检测，计算出一个待测样本中目标核酸序列与校正样本中同一序列表达的相对变化。研发一种能够快速准确检测新型冠状病毒且简单的方法具有重要意义。此外，仍然需要设计性能更优的引物和探针，以快速、特异、灵敏、精确检测新型冠状病毒。
技术实现思路
在本专利技术中，我们成功设计了针对新型冠状病毒的两个基因的引物和探针，利用该引物和探针能够特异性扩增新型冠状病毒SARS-CoV-2样本，具有较好的稳定性、灵敏度和特异度。本专利技术第一方面提供了一种检测冠状病毒的组合物，组合物包括SeqID:1和SeqID:2所示序列组成的第一对引物。利用此引物对可有效扩增新冠状病毒的ORF1ab基因，从而判断是否存在冠状病毒是否存在及是否存在ORF1ab基因片段。本专利技术第二方面提供了一种试剂盒，该试剂盒包含SeqID:1和SeqID:2所示序列组成的第一对引物，和/或SeqID:3和SeqID:4所示序列组成的第二对引物，和/或SeqID:5所示序列的探针，和/或SeqID:5、SeqID:6所示序列的两种探针，其中所述两种探针标记不同的荧光报告基团。由此，根据本专利技术的实施例，本专利技术第二方面提供的试剂盒可分别用于扩增ORF1ab基因和/或N基因，荧光定量PCR检测ORF1ab基因和/或N基因，该试剂盒进行荧光定量PCR进行检测时，具有较好的灵敏度和特异度。本专利技术第三方面提供了一种用于非诊断目的的检测冠状病毒的方法，该方法包括以下步骤：获取待测样本的核酸；使用本专利技术第一方面提供的组合物或第二方面提供的试剂盒对样本核酸进行扩增；获得并分析结果。利用此方法，可以对用于非诊断目的的检测冠状病毒进行有效检测，如对含有冠状病毒ORF1ab基因和/或N基因片段的质粒、纯病毒浓度等进行检测。附图说明图1显示了根据本专利技术一个实施例，荧光定量PCR扩增的扩增曲线；图2显示了根据本专利技术一个实施例，荧光定量PCR扩增的标准曲线；图3显示了根据本专利技术一个实施例，荧光定量PCR扩增的扩增曲线；图4显示了根据本专利技术一个实施例，荧光定量PCR扩增的标准曲线。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。示例中的试剂、检测仪器等，如无特殊说明，可自配或者通过市售途径获取。本专利技术第一方面提供了一种检测冠状病毒的组合物，组合物包括SeqID:1和SeqID:2所示序列组成的第一对引物。利用此引物对可有效扩增新冠状病毒的ORF1ab基因，从而判断是否存在冠状病毒是否存在及是否存在ORF1ab基因片段。根据本专利技术的实施例，检测冠状病毒的组合物还包含SeqID:3和SeqID:4所示序列组成的第二对引物。在一种情况下，这两对引物可以分别进行PCR扩增，分别获得ORF1ab基因和N基因的扩增片段。扩增的片段可通过凝胶电泳等方法进行检测。在另一种情况下，两队引物可以混合后同时进行PCR扩增，同时获得ORF1ab基因和N基因的扩增片段。根据本专利技术的实施例，检测冠状病毒的组合物包含SeqID:1和SeqID:2所示序列组成的第一对引物和SeqID:5所示序列的探针。利用此组合物，可以对ORF1ab基因进行荧光定量PCR扩增，从而可以确定新型冠状病毒的拷贝数或含有的ORF1ab基因片段的拷贝数。根据本专利技术人的实施例，检测冠状病毒的组合物可同时包含SeqID:1-6所示序列。利用此组合物可同时对ORF1ab基因和N基因进行荧光定量PCR扩增，也可分别对俩基因进行荧光定量PCR扩增。优先选择同时对ORF1ab基因和N基因进行荧光定量PCR扩增，其中SeqID:5和SeqID:6所示序列的两种探针标记不同的荧光报告基团，如分别表记FAM、HEX荧光报告基团，荧光淬灭接团选择性标记BHQ。本专利技术第二方面提供了一种试剂盒，该试剂盒包含SeqID:1和SeqID:2所示序列组成的第一对引物，和/或SeqID:3和SeqID:4所示序列组成的第二对引物，和/或SeqID:5所示序列的探针，和/或SeqID:5、SeqID:6所示序列的两种探针。利用本专利技术第二方面提供的试剂盒可分别用于扩增ORF1ab基因和/或N基因，荧光定量PCR检测ORF1ab基因和/或N基因。根据本专利技术的实施例，所述探针是标记报告基团的核酸序列，报告基团是用于荧光PCR检测的荧光报告基团，无特别限制，两种探针可标记相同的荧光基团也可标记不同的荧光基团，优选选择标记不同的荧光基团，如FAM、HEX报告基团，利用标记不同报告基团的探针在荧光PCR过程中可同时采集荧光信号进行分析，可简化操作、节省时间。根据本专利技术的实施例，试剂盒还包含阳性对照。可以理解，阳性对照在生物实验中，可用作反映实验是否成功的判断指标。阳性样品的选择与实验目的直接相关，直接影响实验结果的准确性和有效性。根据本专利技术的实施例，所述的阳性对照选择含有目的检测片段的质粒，其中所述目的片段为ORF1ab本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测冠状病毒的组合物，其特征在于，所述组合物包括：/nSeq ID:1和Seq ID:2所示序列组成的第一对引物。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测冠状病毒的组合物，其特征在于，所述组合物包括：
SeqID:1和SeqID:2所示序列组成的第一对引物。


2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括：
SeqID:3和SeqID:4所示序列组成的第二对引物。


3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括：
SeqID:5所示序列的探针。


4.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括：
SeqID:5和SeqID:6所示序列的两种探针；
其中，所述两种探针标记不同的荧光报告基团。


5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述报告基团选自FAM、HEX。


6.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1-5任一所述的组合物。


7.根据权利要求6...

【专利技术属性】
技术研发人员：张萌，刘磊，李改玲，李妍，冯燕，
申请(专利权)人：深圳市真迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44