耐药基因mcr-8的RPA检测引物组、试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了多粘菌素耐药基因mcr‑8的RPA检测引物组，涉及分子生物学技术领域。包括1对引物和1个探针，并提供了mcr‑8检测试剂盒和非诊断治疗目的检测方法和引物组的应用。本发明专利技术仅需具备温控功能的荧光检测仪器，可在39℃条件下对mcr‑8进行快速、实时、灵敏、准确、便捷的检测。

【技术实现步骤摘要】
耐药基因mcr-8的RPA检测引物组、试剂盒和方法
本专利技术涉及分子生物学
，更具体的说是涉及耐药基因mcr-8的RPA检测引物组、试剂盒和方法。
技术介绍
多粘菌素是聚阳离子多肽类药物，对革兰氏阴性菌耐药菌引起的感染具有良好的疗效，尤其是在耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(Carbapenem-resistantenterobacteriaceae,CRE)等超级耐药菌的治疗上，常作为最后一道防线类药物。而多粘菌素在医学临床、畜牧业及农业上使用的逐年增加及不合理用药情况，给公共卫生安全和畜牧业发展构成了严重威胁。因此建立一种多粘菌素耐药菌株的快速检测方法，进行针对性用药具有重大意义。2016年，由质粒介导的多粘菌素耐药基因mcr-1被发现，且被证明其可在不同菌株间进行水平转移，引起了全世界的广泛关注。目前，mcr基因家族的其它基因(mcr-2-8)也陆续被报道，检测方法大多采用常规PCR、Sanger测序、荧光定量PCR和LAMP等检测方法。这些技术有的耗时耗力，有的灵敏度低，有的需要借助于大型精密仪器。进一步确认mcr-8基因在我国畜禽养殖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种耐药基因mcr-8的RPA检测引物组，其特征在于，包括1对引物和1个探针，引物序列和探针序列如下：/nmcr-8-F2：5’-TCCGTTCCTTTTCTTTCCACTCTATTTCTACTT-3’，SEQ ID NO 1；/nmcr-8-R2：5’-CCTTATAAAACACCATGGTAACCATGGCTAATA-3’，SEQ ID NO 2；/n探针mcr-8-probe：5’-AGACAATAAGCGGGGAGCTTTTAGAATTGATTGTGGTGGTTGGCG-3’，SEQID NO 3；/n其中，所述探针mcr-8-probe中5’端28bp的T由FAM荧光基团标记；5...

【技术特征摘要】
1.一种耐药基因mcr-8的RPA检测引物组，其特征在于，包括1对引物和1个探针，引物序列和探针序列如下：
mcr-8-F2：5’-TCCGTTCCTTTTCTTTCCACTCTATTTCTACTT-3’，SEQIDNO1；
mcr-8-R2：5’-CCTTATAAAACACCATGGTAACCATGGCTAATA-3’，SEQIDNO2；
探针mcr-8-probe：5’-AGACAATAAGCGGGGAGCTTTTAGAATTGATTGTGGTGGTTGGCG-3’，SEQIDNO3；
其中，所述探针mcr-8-probe中5’端28bp的T由FAM荧光基团标记；5’端29bp的G和30bp的A之间插入四氢呋喃分子；5’端31bp的T由BHQ荧光猝灭基团标记。


2.一种基于权利要求1所述引物组的检测试剂盒，其特征在于，包括：冻干酶粉、聚乙二醇、去离子水、10μmol/L的mcr-8-F2、10μmol/L的mcr-8-R2，10μmol/L的探针mcr-8-probe和280mmol/L的醋酸镁溶液。


3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述冻干酶粉由以下成分：220ng/μL重组酶RecA11μg、200ng/μL单链DNA结合蛋白gp3210μg、100ng/μLDNA聚合酶IKlenow5μg、70ng/μL辅助蛋白uvsY3.5μg、80ng/μL核酸外切酶exoIII4μg、3％聚乙二醇1mg、30mMTris0.12mg、120mM乙酸钾0.49mg、3mMAT...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘少宁，李有志，陈智，徐恩民，马艳芳，牛华星，
申请(专利权)人：山东省兽药质量检验所山东省畜产品质量检测中心，
类型：发明
国别省市：山东;37