一种解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的荧光PCR检测方法技术

本发明专利技术公开了一种解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的荧光PCR检测方法，其特征在于，提取待测样本基因组DNA；建立荧光PCR反应体系、反应程序，对提取的DNA样本进行特异性扩增；反应结果的判定。本发明专利技术以解淀粉芽孢杆菌的pgsB基因、枯草芽孢杆菌rpoB基因和地衣芽孢杆菌gyrB基因，设计3组特异性引物与探针，建立荧光PCR检测方法。本发明专利技术提供的荧光PCR检测方法能够快速区分解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌，方法简单、准确，有较好的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的荧光PCR检测方法
本专利技术涉及一种解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的荧光PCR检测方法，适用于环保微生物菌剂中解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的检测，属于微生物

技术介绍
环保微生物菌剂是由一种或多种从自然界分离纯化或经人工选育的微生物菌种(株)所组成的复合微生物制剂，其在水污染控制、大气污染治理、土壤的肥力修复、有毒有害物质的降解、废物资源化、环境监测、环境修复等方面，发挥着重要的作用。芽孢杆菌是一类好氧和兼性厌氧、产生抗逆性内生孢子的革兰氏阳性杆状细菌或球状细菌。具有抗逆性强、生长快速、适应范围广等优点，加之易于制成粉剂，便于储藏运输，利于实现大规模生产，具有很好的应用前景和极大的开发潜力。芽孢杆菌制剂在环保微生物菌剂的市场份额中占比较大。但由于芽孢杆菌属菌株之间的基因序列相似度很高且表型区分不大，尤其是枯草芽孢杆菌近缘种16SrDNA序列的相似性高达98.1％～99.8％，所以这些近缘菌株的鉴定工作困难且繁琐。目前，中国的环保微生物菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的荧光PCR核酸序列，其特征在于，根据解淀粉芽孢杆菌pgsB基因设计的一组引物BA-F/BA-R和探针BA-Pb；根据枯草芽孢杆菌rpoB基因设计的一组引物BS-F/BS-R和探针BS-Pb；根据地衣芽孢杆菌gyrB基因设计的一组引物BL-F/BL-R和探针BL-Pb；对应核苷酸序列分别如下所示：/nBA-F：5’-TGGCGCCATGAGAATCCT-3’；/nBA-R：5’-GCAAAGCCGTTTACGAAATGA-3’；/nBA-Pb：5’-FAM-CCGCTGCTCAGCACGAAGGAGC-TAMRA-3’；/nBS-F：5...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的荧光PCR核酸序列，其特征在于，根据解淀粉芽孢杆菌pgsB基因设计的一组引物BA-F/BA-R和探针BA-Pb；根据枯草芽孢杆菌rpoB基因设计的一组引物BS-F/BS-R和探针BS-Pb；根据地衣芽孢杆菌gyrB基因设计的一组引物BL-F/BL-R和探针BL-Pb；对应核苷酸序列分别如下所示：
BA-F：5’-TGGCGCCATGAGAATCCT-3’；
BA-R：5’-GCAAAGCCGTTTACGAAATGA-3’；
BA-Pb：5’-FAM-CCGCTGCTCAGCACGAAGGAGC-TAMRA-3’；
BS-F：5’-GCGGAATCATCCGTATTGGGGCAGA-3’；
BS-R：5’-AACCTCGCGGGCTTTCTCGCCAA-3’；
BS-Pb：5’-FAM-AACTGAACTGACTGCCGAAGAACGCCT-TAMRA-3’；
BL-F：5’-AAAGCTGATTTGAAAGTCATTGGAGAT-3’；
BL-R：5’-GAGTGGCGAGCGTATCATAGTC-3’；
BL-Pb：5’-FAM-ACGGGAACGACCACACACTTCAAGCCT-TAMRA-3’。


2.一种解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的荧光PCR检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述的用于检测解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌的荧光PCR核酸序列，包括以下步骤：
步骤1)：提取待测样本基因组DNA；
步骤2)：建立荧光PCR反应体系、反应程序，对步骤1)提取的DNA样本进行特异性扩增；
步骤3)：反应结果的判定：循环阈值Ct值≤35，表明P...

【专利技术属性】
技术研发人员：马霞，朱碧云，张子龙，
申请(专利权)人：上海应用技术大学，
类型：发明
国别省市：上海;31