【技术实现步骤摘要】
过表达CsFEX型大肠杆菌及应用和检测方法
本专利技术属于微生物检测领域，涉及一种大肠杆菌的应用及检测方法，尤其涉及一种过表达CsFEX型大肠杆菌及应用和基于该大肠杆菌生长OD值检测溶液中氟含量的方法。
技术介绍
氟在环境中分布十分广泛，由于岩石的风化、自然火山的喷发、人类频繁活动的污染等，土壤、大气、地下水中均存在着一定量的氟。现代工业发展下的氟污染，主要包括电镀、金属加工等工业的含氟废水以及钢铁冶炼和煤炭燃烧过程中排放的氟化氢、四氟化硅等气态污染物，会污染土壤和地下水。人类主要通过饮食摄取氟，吸收的氟大约有一半用于人体骨骼的发育和牙齿的钙化。但若摄入过量的氟，体内多种酶的活性会受到干扰，钙、磷的代谢平衡会遭到破坏，人体患氟斑牙、氟骨症的风险会大大增加，甚至会导致人体瘫痪。饮水型氟中毒和饮茶型氟中毒是常见的两种氟中毒现象，饮水型氟中毒是分布最广泛、患病人数最多的一种类型，主要分布于淮河、秦岭、昆仑山以北的广大地区，与水体中的含氟量高有关。饮茶型氟中毒的现象主要分布在四川、新疆、甘肃等少数民族聚居地，与砖茶和边茶茶汤...
【技术保护点】
1.一种过表达CsFEX型大肠杆菌，其特征在于：所述过表达CsFEX型大肠杆菌是将CsFEX基因连接到表达载体pET-28a后得到pET-CsFEX重组质粒，把pET-CsFEX重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中得到过表达CsFEX型大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-CsFEX。/n
【技术特征摘要】
1.一种过表达CsFEX型大肠杆菌，其特征在于：所述过表达CsFEX型大肠杆菌是将CsFEX基因连接到表达载体pET-28a后得到pET-CsFEX重组质粒，把pET-CsFEX重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中得到过表达CsFEX型大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pET28a-CsFEX。
2.权利要求1所述的过表达CsFEX型大肠杆菌在氟含量检测中的应用。
3.一种基于过表达CsFEX型大肠杆菌检测溶液中氟含量的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
1)配制LB液体培养基和LB固体培养基；
2)在LB固体培养基上划线接种过表达CsFEX型大肠杆菌并过夜培养；
3)挑取单克隆菌落，加入LB液体培养液并培养；
4)目的片段检测并测序，将其与从转录组PRJNA315669中筛选出的CsFEX基因比对，成功的菌液转接到液体LB中并培养；
5)配制含不同浓度氟的LB液体培养基；
6)将步骤4)中所得到的菌液转接到含不同浓度氟LB液体培养基中并培养；
7)紫外检测含不同浓度氟培养液中大肠杆菌生长的OD600值；
8)建立菌液生长OD值与氟含量的关系曲线和回归方程；所述回归方程的具体表达式是：y＝-0.0024x+1.5842；
9)称取步骤1)的LB液体培养基，向其中加入未知浓度的氟，得到含有未知浓度氟的LB液体培养基，将步骤4)中得到的菌液以1：100～1000的比例转接到含有未知浓度氟的LB液体培养基中并在恒温37℃、220rpm下振荡培养12h，得到培养后的菌液；
10)紫外检测步骤9)的培养后菌液中大肠杆菌生长的OD600值，根据步骤8)得到的回归方程，计算即可得到含有未知浓度氟的LB液体培养基中的氟浓度。
4.根据权利要求3所述的基于过表达CsFEX型大肠杆菌检测溶液中氟含量的方法，其特征在于：所述步骤1)中LB液体培养基的组分及含量是胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L；所述LB液体培养基的配制方式是：按比例称取LB液体培养基的各组分，120℃灭菌20min，待冷却至40～50℃后，以1：1000加入与转基因载体对应的抗生素，所述抗生素是卡那霉素；
所述LB固体培养基的组分及含量是胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、琼脂粉15g/L，所述LB固体培养基的...
【专利技术属性】
技术研发人员：王玉花，武子辰，邢安琪，孙怡，徐晓寒，房婉萍，朱旭君，马媛春，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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