一种自发性肺鳞癌小鼠模型的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种自发性肺鳞癌小鼠模型的构建方法，涉及小鼠模型构建技术领域；本发明专利技术通过设计条件性Yap1敲入的打靶载体，构建条件性Yap1敲入的小鼠(Yap1

【技术实现步骤摘要】
一种自发性肺鳞癌小鼠模型的构建方法
本专利技术属于小鼠模型构建
，具体涉及一种自发性肺鳞癌小鼠模型的构建方法。
技术介绍
肺癌是目前人类第一大恶性肿瘤，其发病率和死亡率均占首位。非小细胞肺癌(Non-smallcelllungcancer，NSCLC)占全部肺癌患者的85％；在NSCLC中60～80％是肺腺癌，20～40％是肺鳞癌，而对于肺癌尤其是肺鳞癌的治疗和机理研究，其动物模型必不可少。但是目前已有肺鳞癌小鼠模型，存在诸多明显缺陷，主要是：(1)自发成瘤异常缓慢，常常需要数月甚至1年，非常不利于实验研究；(2)自发肿瘤组织中病理类型不纯，同一肿瘤组织中存在多种病理亚型；(3)由于抑癌基因敲除不具有肺鳞癌发生的特异性等，缺乏引入促癌基因的动物模型的研究。因此，亟需一种更为科学合理的自发性肺鳞癌小鼠模型。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种自发性肺鳞癌小鼠模型的构建方法，构建方法简单，且构建得到的自发肺鳞癌小鼠模型，具有快速成瘤的特点。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：...

【技术保护点】
1.一种自发性肺鳞癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用条件性Yap1敲入的打靶载体，构建条件性Yap1敲入的小鼠Yap1

【技术特征摘要】
1.一种自发性肺鳞癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用条件性Yap1敲入的打靶载体，构建条件性Yap1敲入的小鼠Yap1KI；
(2)将所述条件性Yap1敲入的小鼠与Trp53基因敲除小鼠杂交，得Yap1KI/Trp53KO小鼠。


2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，步骤(1)所述条件性Yap1敲入的打靶载体还包括阴性筛选标记DTA和阳性筛选标记Neo。


3.根据权利要求2所述构建载体，其特征在于，所述条件性Yap1敲入的打靶载体以KI431-basicvector为基础载体，还包括依次连接的小鼠Yap1基因、来源于人的SP-C启动子和小鼠ROSA26基因；所述SP-C启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


4.根据权利要求3所述构建方法，其特征在于，所述小鼠Yap1基因的点突变位点为TCC336GCC。


5.根据权利要求3所述构建方法，其特征在于，所述条件性Yap1敲入的打靶载体的构建方法，包括以下步骤：(a)在小鼠Yap1基因的TCC336GCC位点引入点突变，得突变Yap1基因；
(b)将来源于人的SP-C启动子与所述突变Yap1基因连接，得HumanSP-Cpromoter-mutantmouseYap1CDS-ployA盒；
(c)将所述HumanSP-Cpromoter-mutantmouseYap1CDS-ployA盒以相反方向克隆到ROSA26的内含子1中，得HumanSP-Cpromoter-mutantmouseYap1CDS；
(d)将所述HumanSP-Cpromoter-mutantmouseYap1CDS的序列连接到所述基础载体的KpnI/PmlI酶切骨架中。


6.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，步骤(1)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙建国，李奉，孟令鑫，廖星芸，赵先兰，余永新，廖荣霞，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：重庆;50