细胞的制造方法技术

作为用于以商业水平大规模制造导入了所需物质的细胞的技术，提供一种制造方法，所述制造方法包括：在细胞非粘附性容器内，在能够将物质转染至细胞内的条件下，形成细胞聚集体的工序。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞的制造方法
本专利技术涉及一种细胞的制造方法。更具体而言，涉及一种导入了所需物质的细胞的制造方法。
技术介绍
以往，粘附性细胞中核酸(例如，DNA、或者mRNA及siRNA等RNA)等物质的导入，是通过将细胞接种于培养皿和培养钵等容器之后，对在该容器表面的处于粘附状态的细胞，应用物质和转染试剂(例如，脂质体或多元胺)而进行的。因此，用于细胞粘附的容器的表面面积成为制约，难以以商业水平大规模制造导入了所需物质的细胞。还已知一种通过将物质和转染试剂粘附或涂布于培养皿和培养钵等容器表面之后，将粘附性细胞接种于容器，从而进行细胞中物质的导入的方法(所谓的反向转染法)(专利文献1)。在该方法中，认为是在接种的细胞逐渐粘附于容器表面的过程中将物质导入细胞内。因此，用于细胞粘附的容器的表面面积仍然成为制约，难以以商业水平大规模制造导入了所需物质的细胞。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特表第2008-532480号公报专利文献2：国际公开第2015/141827号非专利文献非专利文献1：Miki等人，“EfficientDetectionandPurificationofCellPopulationsUsingSyntheticMicroRNASwitches”,CellStemCell,16,1-13,2015
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术的主要目的是提供一种用于以商业水平大规模制造导入了所需物质的细胞的技术。>用于解决问题的手段为了解决上述问题，本专利技术提供以下[1]至[35]。[1]一种导入了所需物质(desiredsubstance)的细胞的制造方法，所述制造方法包括：在细胞非粘附性容器内，在能够将所述物质转染至细胞内的条件下，形成细胞聚集体的工序(工序1)。[2]根据[1]所述的制造方法，其中，所述细胞为粘附性细胞。[3]根据[2]所述的制造方法，其中，所述工序1为：在细胞非粘附性容器内，在转染试剂和所述物质以及微载体的存在下培养细胞，形成由导入了所述物质的细胞和所述微载体构成的聚集体。[4]根据[3]所述的制造方法，其中，所述工序1在所述细胞的静置培养下进行。[5]根据[2]所述的制造方法，其中，所述工序1为：在细胞非粘附性容器内，在转染试剂和所述物质的存在下培养细胞，形成由导入了所述物质的细胞构成的聚集体。[6]根据[5]所述的制造方法，其中，所述工序1在所述细胞的静置培养下进行。[7]根据[1]至[6]中任一项所述的制造方法，其中，所述物质为核酸或蛋白质。[8]根据[7]所述的制造方法，其中，所述核酸为miRNA响应性RNA，所述miRNA响应性RNA包括(i)对在特定的细胞内表达的微小RNA(miRNA)进行特异性识别的核酸序列、以及(ii)与所需蛋白质的遗传密码区域对应的核酸序列(这里，(ii)的核酸序列至蛋白质的翻译由(i)的核酸序列控制)。[9]根据[1]至[8]中任一项所述的制造方法，其中，所述细胞为心肌细胞。[10]一种通过[9]所述的制造方法获得的心肌细胞。[11]一种目的细胞(cellofinterest)的制造方法，所述制造方法包括：在细胞非粘附性容器内，在能够将所需物质转染至细胞内的条件下，形成细胞聚集体的工序(工序1)；以及基于所述物质在细胞内的功能，从导入了该物质的细胞中筛选目的细胞的工序(工序2)。[12]根据[11]所述的制造方法，其中，所述细胞为粘附性细胞。[13]根据[12]所述的制造方法，其中，所述工序1为：在细胞非粘附性容器内，在转染试剂和所述物质以及微载体的存在下培养细胞，形成由导入了所述物质的细胞和所述微载体构成的聚集体。[14]根据[13]所述的制造方法，其中，所述工序1在所述细胞的静置培养下进行。[15]根据[12]所述的制造方法，其中，所述工序1为：在细胞非粘附性容器内，在转染试剂和所述物质的存在下培养细胞，形成由导入了所述物质的细胞构成的聚集体。[16]根据[15]所述的制造方法，其中，所述工序1在所述细胞的静置培养下进行。[17]根据[11]至[16]中任一项所述的制造方法，其中，所述物质为核酸或蛋白质。[18]根据[17]所述的制造方法，其中，所述核酸为miRNA响应性RNA，所述miRNA响应性RNA包括(i)对在特定的细胞内表达的微小RNA进行特异性识别的核酸序列、以及(ii)与所需蛋白质的遗传密码区域对应的核酸序列(这里，(ii)的核酸序列至蛋白质的翻译由(i)的核酸序列控制)。[19]根据[18]所述的制造方法，其中，所述细胞包括心肌细胞和非心肌细胞，所述目的细胞为心肌细胞，在所述工序2中，基于有无所述蛋白质的翻译，从导入了miRNA响应性RNA的细胞中筛选心肌细胞。[20]根据[18]所述的制造方法，其中，所述细胞为包括心室肌细胞的心肌细胞，且所述目的细胞为心室肌细胞，在所述工序2中，基于有无所述蛋白质的翻译，从导入了miRNA响应性RNA的心肌细胞中筛选心室肌细胞。[21]一种通过[19]所述的制造方法获得的心肌细胞。[22]一种通过[20]所述的制造方法获得的心室肌细胞。[23]一种将所需物质导入细胞内的方法，所述方法包括：在细胞非粘附性容器内，在能够将所述物质转染至细胞内的条件下，形成细胞聚集体的工序。[24]一种由多能干细胞制造目的细胞的方法，所述制造方法包括：诱导多能干细胞分化为目的细胞的工序(工序A)；使分化诱导后的细胞分散的工序(工序B)；将分散后的细胞导入细胞非粘附性容器内，在能够将所需物质转染至细胞内的条件下，形成细胞聚集体的工序(工序C)；以及基于所述物质在细胞内的功能，从导入了该物质的细胞中筛选所述目的细胞的工序(工序D)。[25]根据[24]所述的制造方法，其中，所述细胞为粘附性细胞。[26]根据[25]所述的制造方法，其中，所述工序C为：在细胞非粘附性容器内，在转染试剂和所述物质以及微载体的存在下培养细胞，形成由导入了所述物质的细胞和所述微载体构成的聚集体。[27]根据[26]所述的制造方法，其中，所述工序C在所述细胞的静置培养下进行。[28]根据[27]所述的制造方法，其中，所述工序C为：在细胞非粘附性容器内，在转染试剂和所述物质的存在下培养细胞，形成由导入了所述物质的细胞构成的聚集体。[29]根据[28]所述的制造方法，其中，所述工序C在所述细胞的静置培养下进行。[30]根据[24]至[29]中任一项所述的制造方法，其中，所述物质为核酸或蛋白质。[31]根据[30]所述的制造方法，其中，所述核酸为miRNA响应性RNA，所述miRNA响应性RNA包括(i)对在特定的细胞内表达的微小RNA进行特异性识别的核酸序列、以及(ii)与所需蛋白质的遗传密码区域对应的核酸序列(这里，(ii)的核酸序列至蛋白质的翻译由(i本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种导入了所需物质的细胞的制造方法，所述制造方法包括：/n在细胞非粘附性容器内，在能够将所述物质转染至细胞内的条件下，形成细胞聚集体的工序。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180330 JP 2018-0692411.一种导入了所需物质的细胞的制造方法，所述制造方法包括：
在细胞非粘附性容器内，在能够将所述物质转染至细胞内的条件下，形成细胞聚集体的工序。


2.根据权利要求1所述的制造方法，其中，
所述细胞为粘附性细胞。


3.根据权利要求2所述的制造方法，其中，所述工序为：
在细胞非粘附性容器内，在转染试剂和所述物质以及微载体的存在下培养细胞，形成由导入了所述物质的细胞和所述微载体构成的聚集体。


4.根据权利要求2所述的制造方法，其中，所述工序为：
在细胞非粘附性容器内，在转染试剂和所述物质的存在下培养细胞，形成...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉田善纪，三木健嗣，蒲池泰治，
申请(专利权)人：国立大学法人京都大学，武田药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP