工程改造的免疫效应细胞和其用途制造技术

提供用于获得功能上增强的衍生效应细胞的方法和组合物，所述衍生效应细胞由定向分化基因组工程改造的iPSC获得。本文所提供的衍生细胞具有稳定和功能性基因组编辑，其递送改善的或增强的治疗效果。还提供治疗性组合物和其用途，所述治疗性组合物包含单独的所述功能上增强的衍生效应细胞，或在组合疗法中包含所述功能上增强的衍生效应细胞与抗体或检查点抑制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程改造的免疫效应细胞和其用途相关申请本申请要求2018年3月29日提交的美国临时申请序列号62/649,781、2018年11月30日提交的美国临时申请序列号62/774,052和2018年12月21日提交的国际申请第PCT/US18/67289号的优先权，其公开内容以全文引用的方式并入本文中。电子提交的序列表的引用本申请以引用的方式并入标题为13601-204-228_SEQ_LISTING.txt的以ASCII文本形式与本申请一起提交的序列表的计算机可读格式(CRF)，其创建于2018年3月28日，并且大小为45,867字节。
本公开与现成的免疫细胞产物领域广泛地相关。更具体地说，本公开与研发能够体内递送治疗相关特性的多功能效应细胞的策略相关。根据本公开研发的细胞产物解决了患者来源的细胞疗法的关键限制。
技术介绍
过继性细胞疗法领域目前的重点是使用患者来源的细胞和供体来源的细胞，这使得实现癌症免疫疗法的持续制造以及向所有可能受益的患者递送疗法尤其困难。还需要改善过继转移的淋巴细胞的功效和存留，以促进良好的患本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于工程改造细胞以获得基因组编辑的细胞的构建体，其包含：(i)在细胞基因组中的CD38基因座中的所选位置处靶向CD38的左同源臂和右同源臂(LHA/CD38、RHA/CD38)，其可操作地连接到(ii)编码一种或多种外源蛋白质的一个或多个核酸序列；/n其中所述基因组编辑的细胞是诱导多能细胞(iPSC)、克隆iPSC或iPS细胞系细胞；/n其中所述基因组编辑的细胞包含在CD38基因座中的所述所选位置处对编码一种或多种外源蛋白质的所述一个或多个核酸序列的靶向整合，以及CD38敲除；并且/n其中所述基因组编辑的细胞是能够分化为iPSC衍生的造血细胞的iPSC。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180329 US 62/649,781;20181130 US 62/774,052;20181.一种用于工程改造细胞以获得基因组编辑的细胞的构建体，其包含：(i)在细胞基因组中的CD38基因座中的所选位置处靶向CD38的左同源臂和右同源臂(LHA/CD38、RHA/CD38)，其可操作地连接到(ii)编码一种或多种外源蛋白质的一个或多个核酸序列；
其中所述基因组编辑的细胞是诱导多能细胞(iPSC)、克隆iPSC或iPS细胞系细胞；
其中所述基因组编辑的细胞包含在CD38基因座中的所述所选位置处对编码一种或多种外源蛋白质的所述一个或多个核酸序列的靶向整合，以及CD38敲除；并且
其中所述基因组编辑的细胞是能够分化为iPSC衍生的造血细胞的iPSC。


2.根据权利要求1所述的构建体，其中编码一种或多种外源蛋白质的所述一个或多个核酸序列在整合后可操作地连接到CD38的内源性启动子并由其驱动；或其中CD38基因座中的所述所选位置在CD38的外显子中。


3.根据权利要求1所述的构建体，其中所述一种或多种外源蛋白质包含以下中的至少一种或两种：(i)高亲和力不可裂解的CD16(hnCD16)或其变体；和(ii)细胞表面表达的外源IL15/IL15受体融合蛋白(IL15RF)或其变体；并且其中所述基因组编辑的细胞和由其衍生的造血细胞包含编码hnCD16和IL15RF或其变体的所述一个或多个核酸序列。


4.根据权利要求3所述的构建体，
(i)其中所述hnCD16或其变体包含以下中的至少一种：
(a)CD16的胞外域中的F176V和S197P；
(b)源自CD64的全部或部分胞外域；
(c)非原生(或非CD16)跨膜域；
(d)非原生(或非CD16)胞内域；
(e)非原生(或非CD16)信号传导域；
(f)非原生刺激域；和
(g)并非源自CD16并且源自相同多肽或不同多肽的跨膜域、信号传导域和刺激域；
或
(ii)其中所述IL15RF或其变体包含以下中的至少一种：
(a)通过使用自我裂解肽共表达的IL15和IL15Rα；
(b)IL15和IL15Rα的融合蛋白；
(c)IL15/IL15Rα与截短IL15Rα的胞内域的融合蛋白；
(d)IL15和IL15Rα的膜结合寿司域的融合蛋白；
(e)IL15和IL15Rβ的融合蛋白；
(f)IL15和共同受体γC的融合蛋白，其中所述共同受体γC是原生的或经过修饰的；
(g)IL15Rβ的同源二聚体；和
(h)编码包含与SEQIDNO:17、19或21具有至少75％、80％、85％、90％、95％或99％一致性的氨基酸序列的IL15RF的多核苷酸。


5.根据权利要求4所述的构建体，其中所述hnCD16或其变体包含以下中的一种或多种：
(i)衍生自CD3D、CD3E、CD3G、CD3ζ、CD4、CD8、CD8a、CD8b、CD27、CD28、CD40、CD84、CD166、4-1BB、OX40、ICOS、ICAM-1、CTLA-4、PD-1、LAG-3、2B4、BTLA、CD16、IL7、IL12、IL15、KIR2DL4、KIR2DS1、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2C、NKG2D或T细胞受体(TCR)多肽的非原生跨膜域；
(ii)衍生自CD27、CD28、4-1BB、OX40、ICOS、PD-1、LAG-3、2B4、BTLA、DAP10、DAP12、CTLA-4或NKG2D多肽的非原生刺激域；
(iii)衍生自CD3ζ、2B4、DAP10、DAP12、DNAM1、CD137(41BB)、IL21、IL7、IL12、IL15、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2C或NKG2D多肽的非原生信号传导域；或
(iv)非原生跨膜域衍生自NKG2D，所述非原生刺激域衍生自2B4，并且所述非原生信号传导域衍生自CD3ζ。


6.根据权利要求1所述的构建体，其中所述基因组编辑的细胞和所述由其衍生的造血细胞进一步包含嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR具有至少一种以下特征：
(i)T细胞特异性或NK细胞特异性的；
(ii)双特异性抗原结合CAR；
(iii)可转换的CAR；
(iv)二聚化CAR；
(v)分离CAR；
(vi)多链CAR；
(vii)诱导性CAR；
(viii)与另一CAR共表达；
(ix)与细胞表面表达的外源细胞因子或其受体的部分或全部肽共表达；
(xi)与检查点抑制剂共表达；
(xii)由进一步包含于所述构建体中的核酸编码，其中在CD38基因座的所述所选位置插入所述CAR；
(xiii)在TRAC基因座插入CAR，和/或由TCR的内源启动子驱动CAR，和/或所述TCR由CAR插入而敲除；
(xiii)对CD19或BCMA具有特异性；和/或
(xiv)对以下中的任一种具有特异性：ADGRE2、碳酸酐酶IX(CAlX)、CCRI、CCR4、癌胚抗原(CEA)、CD3、CD5、CD7、CD8、CD10、CD20、CD22、CD30、CD33、CD34、CD38、CD41、CD44、CD44V6、CD49f、CD56、CD70、CD74、CD99、CD123、CD133、CD138、CDS、CLEC12A、巨细胞病毒(CMV)感染的细胞的抗原、上皮糖蛋白2(EGP2)、上皮糖蛋白-40(EGP-40)、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、EGFRvIII、受体酪氨酸-蛋白激酶erb-B2,3,4、EGFIR、EGFR-VIII、ERBB叶酸结合蛋白(FBP)、胎儿型乙酰胆碱受体(AChR)、叶酸受体a、神经节苷脂G2(GD2)、神经节苷脂G3(GD3)、人类表皮生长因子受体2(HER-2)、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)、ICAM-1、整合素B7、白细胞介素-13受体亚基α-2(IL-13Rα2)、κ-轻链、激酶插入域受体(KDR)、路易斯A(CA19....

【专利技术属性】
技术研发人员：B·瓦拉梅尔，R·比乔戴尔，J·古德里奇，T·T·李，
申请(专利权)人：菲特治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US