一种利用双sgRNA技术敲除MSTN基因的质粒及敲除MSTN基因的方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，特别是涉及一种利用双sgRNA技术敲除MSTN基因的质粒及敲除MSTN基因的方法。所述制备方法包括：设计sgRNA寡聚核苷酸链；将sgRNA寡聚核苷酸链通过程序性退火得到含黏性末端的退火后的sgRNA双链；将退火后的sgRNA双链与酶切处理后的PX459‑puro载体连接得到PX459‑puro‑sgRNA质粒。本发明专利技术提供的质粒的制备方法简单有效，敲除MSTN基因的方法则可以有效敲除MSTN基因，提高桃源黑猪仔猪的生长速率。

【技术实现步骤摘要】
一种利用双sgRNA技术敲除MSTN基因的质粒及敲除MSTN基因的方法
本专利技术涉及分子生物学领域，特别是涉及一种利用双sgRNA技术敲除MSTN基因的质粒及敲除MSTN基因的方法。
技术介绍
随着国民经济飞速发展和人民生活水平的不断提高，消费者们对肉类食品的品质有了更高的需求，但现阶段国内优秀肉类食品仍为一大空缺。市场上常见的肉类食品集中在猪肉。2000～2014年间，我国每年人均购买17.86千克的猪肉相关制品，在全球肉类购买总量中所占的比例为65.98％。中国猪肉市场中流通的肉猪品种繁杂，2011年出版的《中国畜禽遗传资源志·猪志》共收录了76个地方猪种，部分地方猪种具有“三高”的优势，即肌内脂肪含量高、繁殖力高、抗病抗逆抗性高，但通常这些地方猪种也有“三低”的缺陷，即生长速率低、瘦肉率低、饲料报酬低。“三低”缺陷大大抵消了“三高”带来的优势，使地方猪种的发展举步维艰。传统的育种方法主要依赖于杂种优势和自然选择，主要包括诱变育种、杂交育种、多倍体育种和细胞工程育种等手段。但是传统育种手段主要集中在个体水平，育种耗费时间长本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用双sgRNA技术敲除MSTN基因的质粒，其特征在于，所述质粒的制备方法包括以下步骤：/n(1)设计4对sgRNA寡聚核苷酸链，分别命名为MSTN-E1-1-F、MSTN-E1-1-R、MSTN-E1-2-F、MSTN-E1-2-R、MSTN-E3-1-F、MSTN-E3-1-R、MSTN-E3-2-F和MSTN-E3-2-R；所述MSTN-E1-1-F、MSTN-E1-1-R、MSTN-E1-2-F、MSTN-E1-2-R、MSTN-E3-1-F、MSTN-E3-1-R、MSTN-E3-2-F和MSTN-E3-2-R的寡聚核苷酸链的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1～8所示；/...

【技术特征摘要】
1.一种利用双sgRNA技术敲除MSTN基因的质粒，其特征在于，所述质粒的制备方法包括以下步骤：
(1)设计4对sgRNA寡聚核苷酸链，分别命名为MSTN-E1-1-F、MSTN-E1-1-R、MSTN-E1-2-F、MSTN-E1-2-R、MSTN-E3-1-F、MSTN-E3-1-R、MSTN-E3-2-F和MSTN-E3-2-R；所述MSTN-E1-1-F、MSTN-E1-1-R、MSTN-E1-2-F、MSTN-E1-2-R、MSTN-E3-1-F、MSTN-E3-1-R、MSTN-E3-2-F和MSTN-E3-2-R的寡聚核苷酸链的核苷酸序列分别如SEQIDNO:1～8所示；
(2)将步骤(1)所述4对sgRNA寡聚核苷酸链分别通过程序性退火得到含黏性末端的退火后的sgRNA双链；所述退火的体系如下：
正向寡聚核苷酸链9ul
反向寡聚核苷酸链9ul
NEB3.12u...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕延震，印遇龙，于济世，徐康，任红艳，曾经营，华再东，朱喆，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，中国科学院亚热带农业生态研究所，湖南惠生农业科技开发股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42