可特异性清除T细胞的转基因斑马鱼的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了可特异性清除T细胞的转基因斑马鱼的制备方法和应用，其中制备方法包括：将重组质粒pTol2‑lck‑NTR‑mVenus与Tol2转座酶mRNA共同导入野生型斑马鱼胚胎中；以及培养获得稳定遗传的转基因斑马鱼品系，所述稳定遗传的转基因斑马鱼品系即为可特异性清除T细胞的转基因斑马鱼，其中，所述重组质粒pTol2‑lck‑NTR‑mVenus中携带斑马鱼lck基因启动子序列和大肠杆菌NTR基因序列。利用该方法能够有效制备获得在T细胞特异性表达NTR基因且能够稳定遗传的转基因斑马鱼，并且在甲硝唑的作用下，该转基因斑马鱼的少T细胞可以被特异性清除，使其出现免疫功能缺陷，进而，该转基因斑马鱼能够为活体研究免疫细胞发育、器官移植及肿瘤异种移植，以及相关药物筛选提供动物模型。

Preparation and application of transgenic zebrafish with specific T cell scavenging ability

【技术实现步骤摘要】
可特异性清除T细胞的转基因斑马鱼的制备方法及应用
本专利技术涉及斑马鱼模型的制备方法与应用，具体地，涉及可特异性清除T细胞的转基因斑马鱼及其制备方法和应用。更具体地，本专利技术涉及制备可特异性清T细胞的转基因斑马鱼的方法、可特异性清除T细胞的转基因斑马鱼及其在免疫细胞发育的研究、器官移植的研究以及肿瘤异种移植的研究及相关药物筛选中的应用。
技术介绍
斑马鱼因其个体小、养殖成本低、性成熟周期短、体外发育且胚胎透明，便于在体观察等特点，近年来斑马鱼肿瘤异种移植已经成为一种创新的模式用于研究肿瘤。目前进行斑马鱼肿瘤异种移植多选择刚孵化的幼鱼，在适应性免疫功能成熟之前，将人肿瘤细胞异种移植到斑马鱼幼鱼。利用幼鱼建立的肿瘤异种移植模型，通常在一周后幼鱼死亡，不能对肿瘤的行为进行长期观察。为了能在斑马鱼成熟个体建立肿瘤异种移植模型，已有学者利用基因突变策为了能在斑马鱼成熟个体建立肿瘤异种移植模型，已有学者利用基因突变策略建立免疫缺陷斑马鱼品系。Tang等利用基因编辑技术敲除斑马鱼rag2基因(ImagingTumourCellHeterogeneityFo本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可特异性清除T细胞的转基因斑马鱼的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n将重组质粒pTol2-lck-NTR-mvenus与Tol2转座酶mRNA共同导入野生型斑马鱼中；/n以及培养获得稳定遗传的转基因斑马鱼品系，所述稳定遗传的转基因斑马鱼品系即为可特异性清除T细胞的转基因斑马鱼，其中，所述重组质粒pTol2-lck-NTR-mvenus中携带的lck基因启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种可特异性清除T细胞的转基因斑马鱼的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将重组质粒pTol2-lck-NTR-mvenus与Tol2转座酶mRNA共同导入野生型斑马鱼中；
以及培养获得稳定遗传的转基因斑马鱼品系，所述稳定遗传的转基因斑马鱼品系即为可特异性清除T细胞的转基因斑马鱼，其中，所述重组质粒pTol2-lck-NTR-mvenus中携带的lck基因启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组质粒pTol2-lck-NTR-mvenus是通过如下步骤构建获得的：
通过PCR技术扩增大肠杆菌NTR基因，并通过融合PCR技术将大肠杆菌NTR基因与黄色荧光蛋白mVenus基因片段连接获得NTR-mVenus融合蛋白基因片段，通过限制性酶切、T4DNA连接酶连接，将NTR-mVenus融合蛋白基因克隆到已知质粒pTol2-MCS中获得重组质粒pTol2-NTR-mVenus；通过PCR技术扩增斑马鱼lck基因启动子片段，通过限制性酶切、T4DNA连接酶连接，将SEQIDNO.1所示的lck基因启动子克隆到上述质粒pTol2-NTR-mVenus中。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以pCS2-transposase为模板，通过mMESSAGEmMACHINE系统进行体外转录制备Tol2转座酶的mRNA。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将重组质粒pTol2-lck-NTR-mvenus与Tol2转座酶mRNA共同导入野生型斑马鱼中的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：李崇勇，何明芳，蔡阳，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32