一种高效表达AFP3-PTEN融合蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效表达AFP3‑PTEN融合蛋白的方法，属于生物技术领域，本发明专利技术把HBx基因克隆到构建的表达载体中，把构建的载体转染人肝癌细胞，肝癌细胞内表达HBx蛋白后，把AFP第3个结构域和全长PTEN基因连接到表达载体，并转染到表达HBx蛋白的人肝癌细胞中，肝癌细胞内表达HBx蛋白，HBx蛋白促进人类AFP3‑PTEN融合蛋白的高效分泌表达，浓缩纯化培养基获得AFP3‑PTEN融合蛋白。本发明专利技术肝癌细胞表达的AFP3‑PTEN融合蛋白能抑制细胞增殖，它们使NIH 3T3细胞增殖能力下降了15％～60％。而对照蛋白AFP却使细胞增殖能力明显提高22～125％。血清白蛋白却没有显著促进NIH 3T3细胞增殖能力。本发明专利技术获得的AFP3‑PTEN融合蛋白可以用于肿瘤治疗的研究。

【技术实现步骤摘要】
一种高效表达AFP3-PTEN融合蛋白的方法
本专利技术属于生物
，涉及基因工程及蛋白质工程，尤其涉及AFP(人类甲胎蛋白)第3个结构域和PTEN(人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因)融合表达与纯化的方法。
技术介绍
甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，AFP)基因在胎儿发育过程开放表达，而在人出生两年后基本处于关闭状态，但是成人发生肝癌时，AFP的基因重新被激活而大量表达，因而AFP被用作诊断肝癌的标准，AFP可以通过其受体进入癌细胞。因此AFP也可以作为靶向药物的载体，携带抗癌药物等进入癌细胞，从而杀死癌细胞。PTEN蛋白可通过拮抗酪氨酸激酶等的活性而抑制肿瘤的进展。AFP3-PTEN融合蛋白表达的目是通过AFP第3个结构域把PTEN蛋白带入癌细胞，有助于靶向抑制癌细胞活性。目前，经检索尚未见关于利用肝癌细胞高效表达与纯化融合蛋白AFP3-PTEN方法的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种利用肝癌细胞高效表达与纯化AFP3-PTEN融合蛋白的方法，该表达的蛋白活本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效表达AFP3-PTEN融合蛋白的方法，其特征在于：把HBx基因克隆到构建的表达载体中，把构建的载体转染人肝癌细胞，肝癌细胞内表达HBx蛋白后，把AFP第3个结构域和全长PTEN基因连接到表达载体，并转染到表达HBx蛋白的人肝癌细胞中，肝癌细胞内表达HBx蛋白，HBx蛋白促进人类AFP3-PTEN融合蛋白的高效分泌表达，浓缩纯化培养基获得AFP3-PTEN融合蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效表达AFP3-PTEN融合蛋白的方法，其特征在于：把HBx基因克隆到构建的表达载体中，把构建的载体转染人肝癌细胞，肝癌细胞内表达HBx蛋白后，把AFP第3个结构域和全长PTEN基因连接到表达载体，并转染到表达HBx蛋白的人肝癌细胞中，肝癌细胞内表达HBx蛋白，HBx蛋白促进人类AFP3-PTEN融合蛋白的高效分泌表达，浓缩纯化培养基获得AFP3-PTEN融合蛋白。


2.根据权利要求1所述的高效表达AFP3-PTEN融合蛋白的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)表达载体的构建
a、把AFP第3个结构域基因和PTEN全长基因克隆到表达载体PTT5载体中，其C端加上6个组氨酸序列，转化DH5α细胞后提取质粒，得到PTT5-AFP3-PTEN质粒；
b、将HBx全长基因克隆到表达载体PTT5载体中，转化DH5α细胞后提...

【专利技术属性】
技术研发人员：林波，朱明月，李伟，董栩，刘坤，李孟森，
申请(专利权)人：海南医学院，
类型：发明
国别省市：海南;46