CRISPR Cas9条件性基因敲除鼠、建立方法技术

本发明专利技术属于基因敲除技术领域，公开了一种CRISPR Cas9条件性基因敲除鼠、建立方法，通过载体设计和构建，及gRNA和Cas9蛋白的制备；设计gRNA序列和打靶载体；利用In‑Fusion技术构建打靶载体，通过酶切、PCR及测序对打靶载体进行验证；同时制备gRNA和Cas9蛋白；显微注射及F0鼠鉴定；将得到的Donor载体、gRNA和Cas9蛋白共注射到受精卵；将显微注射后的受精卵送回到代孕鼠输卵管中；鼠出生后进行PCR和测序鉴定，获得阳性F0鼠；F1代鼠的繁殖和鉴定；将性成熟的阳性F0鼠分别与野生型鼠配繁一代，成果获得了多囊肾基因PKD1基因敲除小鼠。

【技术实现步骤摘要】
CRISPRCas9条件性基因敲除鼠、建立方法
本专利技术属于基因敲除
，尤其涉及一种CRISPRCas9条件性基因敲除鼠、建立方法。
技术介绍
基因敲除(knockout)是用含有一定已知序列的DNA片段与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，整合至受体细胞基因组中并得到表达的一种外源DNA导入技术。它是针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏蔽，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。基因敲除和基因嵌入技术是上个世纪90年代出现的最新外源DNA导入技术。基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。指外源DNA与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同/相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。此法可产生精确的基因突变，也可正确纠正机体的基因突变。基因嵌入又称基因置换，它是利用内源基因序列两侧或外面的断裂点，用同源序列的目的基因整个置换内源基因。用于基因敲除和基因嵌入的技术有Cre/LoxP系统、FLP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CRISPR Cas9条件性基因敲除鼠建立方法，其特征在于，所述CRISPR Cas9条件性基因敲除鼠建立方法通过载体设计和构建，及gRNA和Cas9蛋白的制备；设计gRNA序列和打靶载体；利用In-Fusion技术构建打靶载体，通过酶切、PCR及测序对打靶载体进行验证；同时制备gRNA和Cas9蛋白；显微注射及F0鼠鉴定；将得到的Donor载体、gRNA和Cas9蛋白共注射到受精卵；将显微注射后的受精卵送回到代孕鼠输卵管中；鼠出生后进行PCR和测序鉴定，获得阳性F0鼠；F1代鼠的繁殖和鉴定；将性成熟的阳性F0鼠分别与野生型鼠配繁一代。/n

【技术特征摘要】
1.一种CRISPRCas9条件性基因敲除鼠建立方法，其特征在于，所述CRISPRCas9条件性基因敲除鼠建立方法通过载体设计和构建，及gRNA和Cas9蛋白的制备；设计gRNA序列和打靶载体；利用In-Fusion技术构建打靶载体，通过酶切、PCR及测序对打靶载体进行验证；同时制备gRNA和Cas9蛋白；显微注射及F0鼠鉴定；将得到的Donor载体、gRNA和Cas9蛋白共注射到受精卵；将显微注射后的受精卵送回到代孕鼠输卵管中；鼠出生后进行PCR和测序鉴定，获得阳性F0鼠；F1代鼠的繁殖和鉴定；将性成熟的阳性F0鼠分别与野生型鼠配繁一代。


2.如权利要求1所述的CRISPRCas9条件性基因敲除鼠建立方法，其特征在于，所述CRISPRCas9条件性基因敲除鼠建立方法利用In-Fusion技术构建打靶载体，通过酶切、PCR及测序...

【专利技术属性】
技术研发人员：马广强，牛玲，韩飞，艾志福，黄小英，杨明，
申请(专利权)人：江西中医药大学，
类型：发明
国别省市：江西;36