基于CRISPR/Cas9系统对博落回PDS基因编辑体系的构建方法及应用技术方案

本发明专利技术提供了一种基于CRISPR/Cas9系统对博落回PDS基因编辑体系的构建方法，包括以下步骤：S1、根据SEQ ID NO.1所示的博落回PDS基因的编码区避开内含子区域设计一条如SEQ ID NO.3所示的靶序列；S2、利用步骤S1所述的靶序列，合成一对互补的靶序列，然后构建真核表达载体，筛选出连接正确的重组载体；S3、将步骤S2中连接正确的表达载体转化农杆菌，并进行博落回外植体的侵染，将外植体进行组织培养后，获得突变植株，构建了基于CRISPR/Cas9的博落回基因的构建体系，为首次在博落回植物中实现基因编辑，为博落回中功能基因挖掘、种质创新等提供有力途径。

【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR/Cas9系统对博落回PDS基因编辑体系的构建方法及应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种基于CRISPR/Cas9系统对博落回PDS基因编辑体系的构建方法及应用。
技术介绍
对基因进行定点修饰，是生物研究领域重要的方法之一。随着科学的发展，越来越多的沉默技术发展迅速。从经典的MES随机诱变，T-DNA或转座子插入失活到锌指结构(ZFs)与转录激活因子样效应物核酸酶(Transcriptionactivator-likeeffectornucleases，TALENs)定点突变，这些技术都大大促进了研究基因功能的进程。但由于锌指核糖核酸酶(ZFN)与转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术需要针对每一个目的基因设计特定的内切酶，且构建过程繁琐，大大限制了其应用范围。与其他沉默体系相比，CRISPR定点突变技术有其无法比拟的优点，逐渐被广泛地应用与基因定点修饰研究中。CRISPR/Cas系统(clustered，regularlyinterspaced，shortpalindromicrepeat本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于CRISPR/Cas9系统对博落回PDS基因编辑体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、根据SEQ ID NO.1所示的博落回PDS基因的编码区避开内含子区域设计一条如SEQID NO.3所示的靶序列；/nS2、利用步骤S1所述的靶序列，合成一对互补的靶序列，然后构建真核表达载体，筛选出连接正确的重组载体；/nS3、将步骤S2中连接正确的表达载体转化农杆菌，并进行博落回外植体的侵染，将外植体进行组织培养后，获得突变植株。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR/Cas9系统对博落回PDS基因编辑体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、根据SEQIDNO.1所示的博落回PDS基因的编码区避开内含子区域设计一条如SEQIDNO.3所示的靶序列；
S2、利用步骤S1所述的靶序列，合成一对互补的靶序列，然后构建真核表达载体，筛选出连接正确的重组载体；
S3、将步骤S2中连接正确的表达载体转化农杆菌，并进行博落回外植体的侵染，将外植体进行组织培养后，获得突变植株。


2.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR/Cas9系统对博落回PDS基因编辑体系的构建方法，其特征在于，步骤S2中合成的互补的靶序列包含BsaI酶切粘性末端。


3.根据权利要求2所述的一种基于CRISPR/Cas9系统对博落回PDS基因编辑体系的构建方法，其特征在于，
包含BsaI酶切粘性末端的靶序列的核苷酸序列如下所示：
pRGEB32-PDS-Guide1-Oligo1：GGCAGAAACAATGAAATGCTTACA
pRGEB32-PDS-Guide1-Oligo2：AAACTGTAAGCATTTCATTGTTTC。


4.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR/Cas9系统对博落回PDS基因编辑体系的构建方法，其特征在于，所述真核表达载体为pRGEB32。


5.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR/Cas9系统对博落回PDS基因编辑体系的构建方法，其特征在于，步骤S2的具体过程如下：
1)将pRGEB32质粒用BsaI酶切成线性化质...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾建国，黄鹏，孙梦姗，
申请(专利权)人：湖南美可达生物资源股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43