【技术实现步骤摘要】
一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法
本专利技术涉及甘蔗培育
，尤其涉及一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法。
技术介绍
由于甘蔗是非整倍性的异源多倍体作物，遗传背景复杂，品种间杂交后代分离广泛，用常规遗传学手段难以阐明其遗传规律，通过常规的杂交育种手段很难将各种优良的目标性状整合在一起，分子育种是获得甘蔗优良品种的重要手段。目前，在甘蔗遗传转化中主要使用的方法有农杆菌介导法和基因枪轰击法，不论是农杆菌介导法还是基因枪轰击法，其转化的受体都是胚性愈伤组织。这些传统的方法均是转化植株的时间比较长，同时效率不高的情况，无法满足现有社会的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法，解决现有甘蔗培育中农杆菌转化后愈伤组织再生困难的技术问题，缩短了获得转化植株的时间、提高了转化效率。一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法，所述方法包括如下步骤：步骤1：选定遗传转化的甘蔗材料、菌种和质粒；步骤2：配制愈伤组织诱导培养基M1、分化培养基M2、生...
【技术保护点】
1.一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n步骤1：选定遗传转化的甘蔗材料、菌种和质粒；/n步骤2：配制愈伤组织诱导培养基M
【技术特征摘要】
1.一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
步骤1：选定遗传转化的甘蔗材料、菌种和质粒；
步骤2：配制愈伤组织诱导培养基M1、分化培养基M2、生根培养基M3、转化培养基MR和共培养基M4；
步骤3：对甘蔗愈伤组织的诱导及分化；
步骤4：制备农杆菌工程菌液；
步骤5：使用农杆菌介导对甘蔗生长点进行遗传转化；
步骤6：对转基因植株进行检测。
2.根据权利要求1所述的一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法，其特征在于：所述步骤1中甘蔗材料选用桂糖35号，菌种选用大肠杆菌菌株JM109和根癌农杆菌菌株EHA105，质粒选用pCAMBIA3301，质粒中含有CaMV35s启动子以及含有编码抗除草剂草丁膦的Bar基因。
3.根据权利要求2所述的一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法，其特征在于：所述步骤2中，愈伤组织诱导培养基M1为MS+2,4-D3.0mg/L+椰汁100ml/L+蔗糖30g/L+Agar6g/L，愈伤组织诱导培养基M1的pH为5.8，分化培养基M2为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+椰汁100ml/L+蔗糖30g/L+Agar6g/L，分化培养基M2的pH为5.8，生根培养基M3为MS+NAA4.0mg/L+椰汁100ml/L+蔗糖30g/L，生根培养基M3的pH为5.8，转化培养基MR为1/2MS大量元素+MS其它成分+2,4-D1.0mg/L+蔗糖30g/L+AS200μmol/L+葡萄糖10mmol/L+果糖10mmol/L，转化培养基MR的pH为5.3，共培养基M4为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+椰汁100ml/L+蔗糖30g/L+Agar6g/L+AS100μmol/L，共培养基M4的pH为5.8，MS大量元素包括硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钾(KNO3)、硫酸镁(MgSO4·7H2O)和磷酸二氢钾(KH2PO4)，MS其它成分包括微量元素、铁盐和有机物成分，微量元素为碘化钾(KI)、硼酸(H3BO3)、硫酸锰(MnSO4·4H2O)、硫酸锌(ZnSO4·7H2O)、钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)、硫酸铜(CuSO4·5H2O)、氯化钴(CoCl2·6H2O)；铁盐：FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O；有机物成分为肌醇、ⅣB烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸。
4.根据权利要求3所述的一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法，其特征在于：所述步骤3的具体过程为，选择田间生长健壮的甘蔗植株尾梢，剥掉叶片，留取28-32cm的尾梢，用75％乙醇消毒表面，剥除4-5层外叶鞘后置于超净工作台内，取其距顶端生长点9-11cm的幼嫩心叶组织作为外植体，横切成0.2～0.5mm厚的薄片接种于愈伤组织诱导培养基M1上，27℃暗培养15-20天，外植体膨大，边缘会长出水渍状愈伤组织，把水渍状的愈伤组织分小块接入新的愈伤组织诱导培养基M1内进行继代增殖培养，15-20天继代一次，直至长出淡黄色、干燥、致密的胚性愈伤组织，其中转接的次数为2-3次...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦翠鲜，黄东亮，陈忠良，汪淼，廖芬，周丽，李傲梅，周建辉，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：广西;45
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