植物叶片离体培养表达蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及植物叶片离体培养表达蛋白的方法。本发明专利技术可以充分将植物叶片进行离体培养，并正常表达产生所需要的重组蛋白。在培养的垂直空间占用上具有非常大的优势，同时不再需要营养土或营养液，成本低廉，价格优势明显，操作简单便捷，适用于大规模的商业化生产使用。

【技术实现步骤摘要】
植物叶片离体培养表达蛋白的方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及植物叶片离体培养表达蛋白的方法。
技术介绍
植物作为一种蛋白生产的生物反应器，具有广阔的应用前景。目前生产重组蛋白的植物培养主要是以建造人工气候室或者培养间、培养箱为主。除了生菜等少数蔬菜可以用水培进行大量生产之外，绝大多数植物依然采用的是土培辅助以LED人工光源的方式或者直接在大田进行种植，进行重组蛋白的生产。现有的几个以植物源重组蛋白为主的公司，如Medicago、Ibio等均在培养间内，利用人工LED光源、营养土培养本氏烟、生菜等植物，并采用农杆菌真空浸润法将需要的表达载体导入到植物叶片细胞中。这样的方法可以在植物上快速生产重组蛋白，不受环境条件和土地资源的制约。但这样子的培养方式也存在一定的缺陷：1、营养土比较昂贵且不易回收利用，成本较高；2、营养土的存在给真空浸润造成很多技术难题，增加设备成本；3、植物在立体式的培养模式下，增加了生产场地的空间占用消耗，增加了生产成本。因此，一种更加高效、集约、低成本的植物培养体系和重组蛋白生产体系是十分必要的。...

【技术保护点】
1.植物叶片离体培养表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤1：构建含有所述重组蛋白的表达载体；/n步骤2：将步骤1制备的所述表达载体导入宿主，培养，收集菌液浸润到植物叶片，获得含有表达载体的植物叶片；/n步骤3：取所述含有表达载体的植物叶片置于植物叶片离体培养装置的支撑渗水部件(5)，培养；/n所述植物叶片离体培养装置包括依次连接的装置覆盖部件(1)、支撑渗水部件(5)、锁水部件(3)和底部承载部件(2)；/n步骤4：收集培养后的植物叶片，提取蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.植物叶片离体培养表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：构建含有所述重组蛋白的表达载体；
步骤2：将步骤1制备的所述表达载体导入宿主，培养，收集菌液浸润到植物叶片，获得含有表达载体的植物叶片；
步骤3：取所述含有表达载体的植物叶片置于植物叶片离体培养装置的支撑渗水部件(5)，培养；
所述植物叶片离体培养装置包括依次连接的装置覆盖部件(1)、支撑渗水部件(5)、锁水部件(3)和底部承载部件(2)；
步骤4：收集培养后的植物叶片，提取蛋白。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组蛋白为GFP荧光蛋白，所述表达载体为农杆菌Ti载体pCambia1300。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1中所述构建含有所述重组蛋白的表达载体采用的上下游引物的序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示。


4.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，步骤1中所述构建含有所述重组蛋白的表达载体选用的扩增体系为：22μlddH2O、25μlKODOneTMPCRMasterMix、1μl10μM上游引物、1μl10μM下游引物、1μl100ng/μl的含有GFP的质粒模板。


5.如权利要求1至4...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑蔚，周昕，赵启超，翟璐，濮云飞，
申请(专利权)人：浙江华缔药业集团医药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33