脂质纳米颗粒制造技术

本发明专利技术涉及脂质纳米颗粒(LNP)领域；更具体地，其包含可离子化的脂质、磷脂、甾醇、PEG脂质和一种或多种核酸。本发明专利技术的LNP的特征在于具有约140nm的最小平均直径，从而诱导更强力的免疫应答。本发明专利技术提供了LNP在核酸分子特别是mRNA的免疫原性递送中的用途；从而使得它们非常适合用于疫苗，例如用于治疗癌症或传染性疾病。最后，提供了用于制备此类LNP的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】脂质纳米颗粒专利
本专利技术涉及脂质纳米颗粒(LNP)领域；更具体地，其包含可离子化的脂质、磷脂、甾醇、PEG脂质和一种或多种核酸。本专利技术的LNP的特征在于具有约140nm的最小平均直径，从而诱导更强力的免疫应答。本专利技术提供了LNP在核酸分子特别是mRNA的免疫原性递送中的用途；从而使得它们非常适合用于疫苗，例如用于治疗癌症或传染性疾病。最后，提供了用于制备此类LNP的方法。专利技术背景生物活性物质的靶向递送领域中的主要挑战之一通常是它们的不稳定性和低的细胞穿透潜力。对于核酸分子特别是(m)RNA分子的递送尤其如此。因此，适当的包装对于充分的保护和递送至关重要。因此，持续需要用于包装生物活性物质例如核酸的方法和组合物。在这方面，基于脂质的纳米颗粒组合物例如脂质复合物和脂质体已被用作生物活性物质的包装载体，以允许转运到细胞中和/或细胞内隔室中。这些基于脂质的纳米颗粒组合物通常包含不同脂质例如阳离子脂质、可离子化的脂质、磷脂、结构脂质(例如甾醇或胆甾醇)、PEG(聚乙二醇)脂质等的混合物(如Reichmuth等人,2016的综述)。尽管许多这类脂质组合物是本领域已知的，但它们通常具有小的直径，即小于200nm，最经常甚至小于140nm。基于脂质的纳米颗粒包含四种脂质(阳离子或可离子化的脂质、磷脂、甾醇和聚乙二醇化脂质)的混合物，其已被开发用于在全身施用后向肝脏非免疫原性递送siRNA和mRNA。为了引起最佳的肝细胞摄取和表达，这些LNP通常显示70-100nm的小尺寸(Li等人,Nanoletters2015；Thess等人,Molther2015；Kauffman等人,Biomaterials2016)。除肝脏靶向外，LNP还已被用于将编码抗原的mRNA免疫原性递送至肌肉或真皮(Richner等人Cell2017；Liang等人,MolTher2017)。在这种情况下，还是通常使用小尺寸(80-120nm)的LNP，因为这种小尺寸已显示对免疫原性至关重要，并且小尺寸的LNP有效地到达注射引流淋巴结，而较大的LNP保留在注射部位(参见Reichmuth等人，2016)。我们现在已经令人惊讶地发现，与通常认为的小尺寸的颗粒对于LNP介导的mRNA递送是有益的观点相反，直径大于140nm，优选甚至大于200nm的纳米颗粒非常适合于在LNP的全身性注射后免疫原性递送mRNA，这似乎与mRNA向脾脏的递送增强有关。专利技术概述在第一方面，本专利技术提供了脂质纳米颗粒(LNP)，其包含可离子化的脂质、磷脂、甾醇、PEG脂质和一种或多种核酸分子，其特征在于，所述LNP具有约140nm、更优选约200nm的最小平均直径。在一个具体的实施方案中，所述可离子化的脂质是式(I)的化合物：其中：RCOO选自包含以下的列表：肉豆蔻酰基、α-D-生育酚琥珀酰基、亚油酰基和油酰基；和X选自包含以下的列表：更具体地，所述可离子化的脂质是式(I)的脂质，其中RCCO是α-D-生育酚琥珀酰基，并且X是在本专利技术的另一个实施方案中，所述甾醇选自包含以下的列表：胆甾醇、麦角甾醇、菜油甾醇、氧甾醇、antrosterol、链甾醇、nicasterol、谷甾醇和豆甾醇；优选胆甾醇。在另一个具体的实施方案中，所述磷脂选自包含以下的列表：1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)，1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)，1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DLPC)，1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(DMPC)，1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)，1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)，1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)，1,2-二十一烷酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(DUPC)，1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POPC)，1,2-二-O-十八碳烯基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:0二醚PC)，1-油酰基-2-胆甾醇基半琥珀酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(OChemsPC)，1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(C16LysoPC)，1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，1,2-二十二碳己酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(ME16.0PE)，1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺，1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺，1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺，1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺，1,2-二十二碳己酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺，1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-rac-(1-甘油)钠盐(DOPG)，鞘磷脂及其混合物。在一个更具体的实施方案中，所述磷脂选自包含以下的列表：1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)，1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)及其混合物。在又一个实施方案中，所述PEG脂质选自包含以下的列表：PEG修饰的磷脂酰乙醇胺，PEG修饰的磷脂酸，PEG修饰的神经酰胺，PEG修饰的二烷基胺，PEG修饰的二酰基甘油，PEG修饰的二烷基甘油及其混合物。在另一个具体的实施方案中，应用以下一者或多者：-所述LNP占所述可离子化的脂质的约10mol％至60mol％；-所述LNP占所述甾醇的约15mol％至50mol％；-所述LNP占所述PEG脂质的约0.5mol％至10mol％；和/或-所述LNP占所述磷脂的约5mol％至40mol％。在另一个具体的实施方案中，所述一种或多种核酸分子选自(m)RNA和DNA分子；尤其是一种或多种mRNA分子。在一个具体的实施方案中，所述一种或多种mRNA分子选自包含以下的列表：编码免疫调节性多肽的mRNA分子，例如(加上所有潜在分子的列表)和/或编码抗原和/或疾病特异性mRNA的mRNA分子。在一个非常具体的实施方案中，所述一种或多种mRNA分子选自包含以下的列表：编码CD40L、CD70和caTLR4的mRNA分子；和/或编码抗原和/或疾病特异性mRNA的mRNA分子。本专利技术还提供了包含本文所定义的一种或多种LNP的药物组合物或疫苗。此外，本专利技术提供了用于人类或兽医医学的如本文所定义的LNP或包含一种或多种这样的LNP的药物组合物。在另一方面，本专利技术提供了一种用于制备根据本专利技术的LNP的方法，包括：-制备包含所述可离子化的脂质、所述磷脂、所述甾醇、所述PEG脂质和合适的醇溶剂的第一醇组合物；-制备包含所述一种或多种核酸和水性溶剂的第二水性组合物；-使用以下设置在微流体混合装置中混合所述第一和第二组合物：-总流速(FR)为约0.5至约8ml/min，优选为约1至4ml/min。-流速比(FRR)为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脂质纳米颗粒(LNP)，其包含：/n-可离子化的脂质；/n-约5mol％至约15mol％的选自包含DOPE、DOPC及其混合物的列表的磷脂；/n-甾醇；/n-PEG脂质；和/n-一种或多种核酸分子；/n其特征在于，所述LNP具有约140nm的最小平均直径。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180118 EP 18152390.3;20190104 EP 19150351.51.一种脂质纳米颗粒(LNP)，其包含：
-可离子化的脂质；
-约5mol％至约15mol％的选自包含DOPE、DOPC及其混合物的列表的磷脂；
-甾醇；
-PEG脂质；和
-一种或多种核酸分子；
其特征在于，所述LNP具有约140nm的最小平均直径。


2.根据权利要求1所述的LNP，其中所述可离子化的脂质是式(I)化合物：



其中：
RCOO选自包含以下的列表：肉豆蔻酰基、α-D-生育酚琥珀酰基、亚油酰基和油酰基；和
X选自包含以下的列表：



优选地，所述可离子化的脂质是式(I)的脂质，其中RCCO是α-D-生育酚琥珀酰基，和X是





3.根据权利要求1-2中任一项所述的LNP，其中所述甾醇选自包含以下的列表：胆甾醇、麦角甾醇、菜油甾醇、氧甾醇、antrosterol、链甾醇、nicasterol、谷甾醇和豆甾醇；优选胆甾醇。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的LNP，其中所述PEG脂质选自包含以下的列表：PEG修饰的磷脂酰乙醇胺、PEG修饰的磷脂酸、PEG修饰的神经酰胺、PEG修饰的二烷基胺、PEG修饰的二酰基甘油、PEG修饰的二烷基甘油及其混合物。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的LNP，其中所述LNP占所述可离子化的脂质的约10mol％至60mol％和/或所述LNP占所述甾醇的约15mol％至50mol％。


6.根据权利要求1-5中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·德科克，S·贝维尔斯，P·汤米，
申请(专利权)人：伊泽阿恩埃免疫疗法股份有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE