mRNA制剂制造技术

本发明专利技术涉及mRNA制剂的领域，并且特别地提供了下列组分的组合：一种或多种编码功能性免疫刺激蛋白CD40L、CD70和caTLR4的mRNA分子；和一种或多种编码抗原的mRNA分子。特别地，本发明专利技术的组合的特征在于，所述mRNA分子包含5

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】mRNA制剂
专利

[0001]本专利技术涉及mRNA制剂的领域，并且特别地提供了下列组分的组合：一种或多种编码功能性免疫刺激蛋白CD40L、CD70和caTLR4的mRNA分子；和一种或多种编码抗原的mRNA分子。特别地，本专利技术的组合的特征在于，所述mRNA分子包含5
’
CAP
‑
1结构并且可以进一步包含一个或多个经修饰的核苷，例如假尿苷。本专利技术还提供了包含所述组合的组合物及其用途，特别是在疫苗接种和治疗细胞增殖性病症中的用途。
[0002]专利技术背景
[0003]由mRNA疫苗引发的T细胞应答的大小程度和功能特征受到施用途径、递送载料和mRNA的内在特性之间的复杂相互作用支配。施用途径将会决定mRNA在器官和细胞水平上的生物分布。在这方面，用复合入纳米载体中的mRNA进行静脉内免疫接种已出现成为用于引发高大小程度/高质量T细胞应答的特别有力的方法，然而免疫原性关键性地取决于递送载料的物理化学特性。最后，mRNA形式本身可能对于免疫原性具有巨大影响。取决于其5'帽结构以及取决于ssRNA和dsRNA序列基序的存在，体外转录(IVT)出的RNA确实可以被各种RNA感受器所识别。然而，这些RNA感受器的触发会引发必需的细胞因子应答以支持T细胞分化，它也会引发旨在降解mRNA和关闭翻译停止的抗病毒标记。因此，在mRNA疫苗的情况下，需要紧密地平衡先天激活以使得由mRNA所编码的抗原能够充分表达。
[0004]在本文中，我们探讨了不同mRNA形式对于由疫苗所引发的T细胞应答的大小程度和功能特性的影响。在该研究中探讨三种不同的mRNA形式，其在它们被先天免疫系统识别的程度方面有所不同：1)经ARCA加帽的、未修饰的mRNA，2)经CleanCap加帽的、未修饰的mRNA，3)经CleanCap加帽的、经修饰的mRNA。经ARCA加帽的mRNA具有所谓的5
’
Cap
‑
0结构，其使mRNA稳定并且驱动翻译起始，但是被几个驱动RNA降解和翻译停止的RNA感受器所识别。而经CleanCap加帽的mRNA具有Cap
‑
1结构，其致使mRNA对于数种RNA感受器(MDA
‑
5、RIG
‑
I和IFIT
‑
1)是不可见的。真核生物mRNA通常具有各种内置的核苷修饰(例如，假尿苷、5
‑
甲基胞苷、N1
‑
甲基假尿苷)，其降低它们与Toll
‑
样受体(TLR)3、7和8的相互作用。对于所有三种mRNA形式，我们评估了TriMix(编码功能性免疫刺激蛋白CD40L、CD70和caTLR4的mRNA分子)对于所引发的T细胞应答的大小程度以及对于所引起的早期细胞因子应答的影响。
[0005]我们的研究揭示了在T细胞应答和早期炎症应答方面在不同的mRNA形式之间的重大差异。经ARCA加帽的、未修饰的mRNA在静脉内注射后引发最突出的炎症应答。血清细胞因子滴度通过转换至经CleanCap加帽的mRNA而显著降低，并且通过伴随的将尿苷置换为N1
‑
甲基假尿苷而进一步减小。对于所测试的mRNA形式，TriMix的添加均未加重全身细胞因子应答。
[0006]在T细胞应答的大小程度方面，在TriMix不存在下(仅抗原)在三种不同的mRNA形式之间未观察到显著差异。虽然如此，在添加TriMix后，在mRNA形式之间出现T细胞应答的强烈差异。然而，在经ARCA加帽的、未修饰的mRNA的情况下TriMix未改善T细胞应答的大小程度，和在经CleanCap加帽的、未修饰的mRNA和经CleanCap加帽的、经修饰的mRNA的情况下TriMix强烈地增强T细胞应答的大小程度。总之，在用比例为5:5的E7:TriMix和以经
CleanCap加帽的未修饰的mRNA和经CleanCap加帽的经修饰的mRNA形式进行免疫接种的情况下，T细胞应答升高最多，高至所有特异于E7的循环CD8 T细胞的80％。
[0007]专利技术概述
[0008]在第一个方面，本专利技术提供了组合，其包含：
[0009]‑
一种或多种编码功能性免疫刺激蛋白CD40L、CD70和caTLR4的mRNA分子；和
[0010]‑
一种或多种编码抗原的mRNA分子，
[0011]其中所述mRNA分子中的至少一种以具有5
’
CAP
‑
1结构为特征。
[0012]在本专利技术的一个特别的实施方案中，至少2种、至少3种或所有所述mRNA分子具有5
’
CAP
‑
1结构。
[0013]在另一个特别的实施方案中，所述mRNA分子进一步包含至少一个经修饰的核苷，其例如选自包括下列各项的列表：假尿苷、5
‑
甲氧基尿苷、5
‑
甲基胞苷、2
‑
硫代尿苷和N6
‑
甲基腺苷。
[0014]在一个进一步的特别的实施方案中，所述经修饰的核苷可以为从包括下列各项的列表中选择的假尿苷：4
‑
硫代假尿苷、2
‑
硫代假尿苷、1
‑
羧甲基假尿苷、1
‑
丙炔基假尿苷、1
‑
牛磺酸甲基假尿苷、N1
‑
甲基假尿苷、4
‑
硫代
‑1‑
甲基假尿苷、2
‑
硫代
‑1‑
甲基假尿苷、1
‑
甲基
‑1‑
脱氮假尿苷、2
‑
硫代
‑1‑
甲基
‑1‑
脱氮假尿苷、二氢假尿苷、2
‑
硫代
‑
二氢假尿苷、4
‑
甲氧基假尿苷和4
‑
甲氧基
‑2‑
硫代假尿苷。在一个非常特别的实施方案中，所述至少一个经修饰的核苷为N1
‑
甲基假尿苷。
[0015]在另一个特别的实施方案中，在所述mRNA分子中的尿苷的大约100％被N1
‑
甲基假尿苷替代。
[0016]本专利技术进一步提供了药用组合物，其包含在本文中所定义的组合和至少一种在药学上可接受的试剂。
[0017]在另一个特别的实施方案中，在本文中所定义的组合被配制成纳米颗粒，例如脂质纳米颗粒或聚合物纳米颗粒。
[0018]在一个进一步的实施方案中，在本文中所定义的组合物被配制成用于静脉内、结内、肿瘤内、皮下、真皮内或肌内制剂。
[0019]在另外一个进一步的特别的实施方案中，根据本专利技术的组合物可以以疫苗的形式。
[0020]在本专利技术的一个特别的实施方案中，所述抗原为癌症抗原。
[0021]本专利技术进一步提供了在本文中所定义的组合或组合物，其用于在人或兽医医学中使用，更特别地用于在疫苗接种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.组合，其包含：
‑
一种或多种编码功能性免疫刺激蛋白CD40L、CD70和caTLR4的mRNA分子；和
‑
一种或多种编码一种或多种抗原或表位的mRNA分子，其中所述mRNA分子中的至少一种以具有5
’
CAP
‑
1结构为特征。2.权利要求1中所定义的组合，其中所有所述mRNA分子都具有5
’
CAP
‑
1结构。3.权利要求1或2中任一项之中所定义的组合，其中所述mRNA分子进一步包含至少一个经修饰的核苷。4.权利要求3中所定义的组合，其中所述至少一个经修饰的核苷选自包括下列各项的列表：假尿苷、5
‑
甲氧基尿苷、5
‑
甲基胞苷、2
‑
硫代尿苷和N6
‑
甲基腺苷。5.权利要求3或4中任一项之中所定义的组合，其中所述至少一个经修饰的核苷为从包括下列各项的列表中选择的假尿苷：4
‑
硫代假尿苷、2
‑
硫代假尿苷、1
‑
羧甲基假尿苷、1
‑
丙炔基假尿苷、1
‑
牛磺酸甲基假尿苷、N1
‑
甲基假尿苷、4
‑
硫代
‑1‑
甲基假尿苷、2
‑
硫代
‑1‑
甲基假尿苷、1
‑
甲基
‑1‑
脱氮假尿苷、2
‑
硫代
‑1‑
甲基...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：伊泽阿恩埃免疫疗法股份有限公司，
类型：发明
国别省市：