一种抗ASFV-p30蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了2株抗ASFV‑p30蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用，以及所述纳米抗体与HRP融合蛋白的表达制备方法，同时评价了所述纳米抗体与HRP融合蛋白在检测猪血清中抗ASFV抗体中的应用，属于生物技术领域。将所述抗ASFV‑p30蛋白纳米抗体与HRP融合蛋白应用于建立检测猪血清中抗ASFV抗体的ELISA中，建立的方法操作简单，检测样品耗时短，不需要使用酶标二抗。为后续将该两株纳米抗体应用于ASFV抗体检测的商品化ELISA试剂盒的开发提供了关键的材料。

【技术实现步骤摘要】
一种抗ASFV-p30蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种抗ASFV-p30蛋白的纳米抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
非洲猪瘟(AfricanSwinefever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(AfricanSwinefevervirus，ASFV)感染引起的猪的急性、高度接触性、热性传染病，各品种和各年龄段的家猪及野猪均易感。猪只一旦感染死亡率可达100％，是我国重点防范的一类动物疫情，同时也是世界动物卫生组织(OIE)法定报告的动物疫病。该病的特征是发病时间短，其中最急性和急性感染病例死亡率高达100％，临床症状为发热，心跳、脉搏增快，呼吸困难，皮肤发绀，有的患猪咳嗽，眼、鼻有分泌物，多处粘膜出血明显。ASFV是唯一的非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属的成员，是一种双链DNA病毒，基因组大小约为170-193kb，含有150-167个开放阅读框，编码150-200种蛋白质。目前有50个病毒编码蛋白已知其功能，其中大部分是病毒的结构蛋白，仍有一半以上的ASFV编码蛋白功能尚不清楚。其中，p30是ASF本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗ASFV-p30蛋白的纳米抗体，其特征在于：命名为ASFV-p30-Nb12，氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗ASFV-p30蛋白的纳米抗体，其特征在于：命名为ASFV-p30-Nb12，氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。


2.一种抗ASFV-p30蛋白的纳米抗体，其特征在于：命名为ASFV-p30-Nb37，氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。


3.根据权利要求1-2任一项所述的纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将ASFV-p30蛋白与佐剂乳化后，注射双峰驼动物，连续注射五次，每次间隔2周；
(2)最后一次注射免疫7天后，采集外周血分离淋巴细胞，构建抗ASFV-p30蛋白的噬菌体展示文库；
(3)利用噬菌体展示技术，淘汰掉不结合的噬菌体，筛选并测序获得了特异性结合噬菌体的两种不同的纳米抗体。


4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述佐剂具体为：第一次用完全弗氏佐剂，后四次用不完全弗氏佐剂。


5.一种编码权利要求1所述纳米抗体氨基酸序列的核苷酸分子，其特征在于：所述核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。


6.一种编码权利要求2所述纳米抗体氨基酸序列的核苷酸分子，其特征在于：所述核苷酸序列如SEQIDNo.4所示。


7.一种含有权利要求1-2任一项所述的纳米抗体与辣根过氧化物酶的融合蛋白，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵钦，赵加凯，孙亚妮，周恩民，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61