能够与AAV1-13结合的抗体制造技术

本发明专利技术涉及免疫学领域，具体而言，涉及一种能够与AAV1‑13结合的抗体。该抗体能够识别AAV1‑13全部血清型的VP1、VP2和VP3蛋白，且亲和力高，特异性好，由于VP蛋白位于腺相关病毒表面，因而可以更方便地用于腺相关病毒的分离及鉴定。

Antibodies that bind to aav1-13

【技术实现步骤摘要】
能够与AAV1-13结合的抗体
本专利技术涉及免疫学领域，具体而言，涉及一种能够与AAV1-13结合的抗体。
技术介绍
腺相关病毒（Adeno-associatedVirus，AAV）属于细小病毒科（parvoviridae），是一类无法自主复制、无包膜的二十面体微小病毒，直径约为20-26nm，单链线状DNA结构。经过改造的rAAV病毒工具已被广泛的应用在动物水平的基因表达、基因操作和基因治疗。目前AAV有13种血清型（即AAV1-13），不同的血清型对组织或器官有着不同的亲和性，其中AAV2、AAV3、AAV9源自人类本身，是迄今研究最为彻底、应用最为广泛的腺相关病毒载体。AAV是简单的非致病性单链DNA病毒，需要辅助病毒参与生活周期，辅助病毒通常为腺病毒（Ad）或者单纯疱疹病毒（HSV）。基因组两端为末端反向重复序列（ITR），中间基因组编码两个蛋白：Cap和Rep。Cap基因编码三个衣壳蛋白质VP1、VP2和VP3。目前AAV的纯化使用的是碘克沙醇密度梯度离心，如果使用离子交换层析包括反向离子交换层析(包括阳离子和阴离子层析)的纯化方法，虽然纯度高，但是回收效率低，且条件苛刻。
技术实现思路
本专利技术涉及一种抗体，其包含氨基酸序列依次如SEQIDNO:1~3所示的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3，以及氨基酸序列依次如SEQIDNO:4~6所示的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。本专利技术还涉及用于表达生产所述抗体的核酸、载体及宿主细胞。本专利技术还涉及所述抗体的生成方法。本专利技术还涉及用于分离或鉴定腺相关病毒或腺相关病毒片段的试剂、试纸条或试剂盒，其包含如上所述的抗体。本专利技术还涉及用于分离腺相关病毒或腺相关病毒片段的层析介质，所述层析介质包括基体支持物和固定于所述基体支持物上的如上所述的抗体。本专利技术的有益效果为：能够识别AAV1-13全部血清型的VP蛋白（VP1、VP2和VP3蛋白），且亲和力高，特异性好，由于VP蛋白位于腺相关病毒表面，因而可以更方便地用于腺相关病毒的分离及鉴定。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术一个实施例中构建得到的包含抗原的表达载体；图2为本专利技术一个实施例中抗原蛋白表达后的电泳图；图3为本专利技术一个实施例中抗原蛋白经纯化后的电泳图；1和2泳道为目的蛋白条带所在泳道；图4A～图4E为本专利技术一个实施例中对所得抗体的WesternBlot检测结果图；其中图4A为本专利技术请求保护的抗体，图4B～图4E为对照抗体；各电泳图的泳道依次为Marker、AAV1~13；图5为本专利技术一个实施例中通过ELISA检测所得抗体的效价；图6A和图6B为本专利技术一个实施例中对所得抗体亲和层析应用的验证；其中图6A为AAV1~AAV6洗脱后的电泳结果；图6B为AAV7~AAV13洗脱后的电泳结果。具体实施方式现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。因此，旨在本专利技术覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本专利技术的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述，而非意在限制本专利技术更广阔的方面。本专利技术涉及一种抗体，其包含氨基酸序列依次如SEQIDNO:1~3所示的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3，以及氨基酸序列依次如SEQIDNO:4~6所示的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。该抗体能够特异性识别VP1、VP2、VP3的重叠区域，并且能够识别AAV1-13任意一种或多种（例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13种），因而可广泛地用于AAV的富集/检测，特别适用于待处理样本中AAV的血清型未知或含有多种AAV血清型的情况。在本专利技术中，“抗体”此技术术语是结合特定抗原的蛋白，其泛指包含互补决定区（CDR区）的一切蛋白及蛋白片段，特别是全长抗体或抗体功能片段。“全长抗体”此用语包括多克隆抗体及单克隆抗体，术语“抗体功能片段”是包含抗体CDR的一部分或全部的物质，其缺乏至少一些存在于全长链中的氨基酸但仍能够特异性结合至抗原。此类片段具生物活性，因为其结合至靶抗原，且可与其他抗原结合分子(包括完整抗体)竞争结合至给定表位。在一些实施方式中，抗体或抗体功能片段具有特异性识别并结合AAV1-13任意一种的作用。在一些实施方式中，抗体或抗体功能片段是与AAV1-13任意一种的VP蛋白片段结合。这种结合通常是特异性的。在一个方面中，此类片段将包含单个重链和单个轻链，或其部分。所述片段可通过重组核酸技术产生，或可通过抗原结合分子(包括完整抗体)的酶裂解或化学裂解产生。术语“互补性决定区”或“CDR”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区，如Kabat等人所定义（Kabat等人，Sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thEd"USDepartmentofHealthandHumanServices,NIH,1991,和后来的版本）。有三种重链CDR和三种轻链CDR。此处，取决于情况，术语“CDR”用于指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体与其识别的抗原或表位的结合亲和力起作用的主要氨基酸残基的区域。在另一具体实施方式中，CDR区或CDR是指IMGT定义的免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区。术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体对预先确定的抗原上的表位的结合。通常，抗体以大约小于10-6M，例如大约小于10-7M、10-8M、10-9M或10-10M或更小的亲和力(KD)结合。抗体的变体也在本专利技术所请求保护的范围内，例如各自与本专利技术所述的各个CDR或FR、或可变区VL和/或VH、或抗体全长的氨基酸或核苷酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98%、99％或高于99％同一性的序列。在一些情况下，抗体的变体至少包括上述6个CDR；在一些情况下，抗体的变体至少包括一个重链和一个轻链，而在其他情况下，变体形式含有两个相同的轻链和两个相同的重链(或其子部分)。在一些情况下，抗体的变体是在本专利技术所提供的抗体序列上发生保守修饰或保守置换或取代所得到的。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 抗体，其特征在于，包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1~3所示的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3，以及氨基酸序列依次如SEQ ID NO:4~6所示的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。/n

【技术特征摘要】
1.抗体，其特征在于，包含氨基酸序列依次如SEQIDNO:1~3所示的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3，以及氨基酸序列依次如SEQIDNO:4~6所示的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。


2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，还包含序列依次如SEQIDNO:7~10所示的重链骨架区H-FR1、H-FR2、H-FR3及H-FR4；和/或；序列依次如SEQIDNO:11~14所示的轻链骨架区L-FR1、L-FR2、L-FR3及L-FR4。


3.根据权利要求1或2所述的抗体，其特征在于，所述抗体具有恒定区，重链恒定区序列选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD任意一种的恒定区序列；轻链恒定区为κ或λ链。


4.根据权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述恒定区的种属来源选自牛、马、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡或人。


5.核酸，其特征在于，编码权利要求1~4任一项所述的抗体。


6.载体，其特征在于，包含权利要求5所述的核酸。


7.细胞，其特征在于，包含根据权利要求5所述的核酸或权利要求6所述的载体。


8.生产权利要求1~4任一项所述的抗体的方法，其特征在于，包括：
在合适的培养条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨兴林，韦厚良，贾国栋，杨佳丽，夏清梅，
申请(专利权)人：和元生物技术上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31