快速筛选新冠病毒RBD特异性全人源中和性单克隆抗体方法技术

本发明专利技术属于单克隆技术领域，具体公开了快速筛选新冠病毒RBD特异性全人源中和性单克隆抗体方法，包括以下步骤：S1‑S3、采集新冠肺炎康复患者的外周血，分选RBD特异性记忆B细胞，采用RT‑PCR扩增获得抗体可变区cDNA；S4、采用巢式PCR扩增S1‑S3得到的抗体可变区cDNA，构建抗体可变区基因表达盒；S5、将S4得到的抗体可变区基因表达盒转导入细胞表达抗体并收集上清，筛选RBD特异性单克隆抗体；S6、将S5得到的RBD特异性抗体上清，检测阻断假病毒感染细胞活性，同时使用ELISA检测上清阻断RBD与ACE2结合能力，双重方法检测单克隆抗体中和能力，筛选RBD特异性中和性单克隆抗体。本发明专利技术能够快速、高效获得新冠病毒RBD特异性全人源中和性单克隆抗体。

【技术实现步骤摘要】
快速筛选新冠病毒RBD特异性全人源中和性单克隆抗体方法
本专利技术属于单克隆
，尤其涉及快速筛选新冠病毒RBD特异性全人源中和性单克隆抗体方法。
技术介绍
研究发现：新冠病毒(SARS-CoV-2)具有四种主要的结构蛋白，分别为刺突蛋白(S蛋白)、核衣壳蛋白(N蛋白)、膜蛋白(M蛋白)和包膜蛋白(E蛋白)，其中S蛋白有S1和S2两个亚基，受体结合位点(RBD)位于S1亚基上，其主要功能是识别宿主细胞表面受体，介导SARS-CoV-2与宿主细胞的融合。目前针对新发病原体COVID-19尚无特效药物针对性治疗，疫苗研发尚需时日。近期治愈出院的患者血浆中含有高浓度特异性的抗原中和抗体，输入患者体内后，可以中和新冠病原体，介导有效的免疫反应，因此利用恢复期血浆有望为救治感染新冠病毒的患者提供有效的治疗手段，降低死亡率，保障患者生命安全。申请公开号为CN111303280A的中国专利技术专利申请公开了一种高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体，该专利通过以下步骤筛选和制备单克隆抗体：(1)采用流式细胞仪分选单个被标记(CD本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.快速筛选新冠病毒RBD特异性全人源中和性单克隆抗体方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1-S3、采集新冠肺炎康复患者的外周血，分选RBD特异性记忆B细胞，再通过RBD特异性记忆B细胞的mRNA获得抗体可变区cDNA；/nS4、构建抗体可变区基因表达盒；/nS5、将S4得到的抗体可变区基因表达盒转导入细胞表达抗体并收集上清，筛选RBD特异性单克隆抗体；/nS6、将S5得到的RBD特异性抗体上清，检测阻断假病毒感染细胞活性，同时检测上清阻断RBD与ACE2结合能力，双重方法检测单克隆抗体中和能力，筛选RBD特异性中和性单克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
1.快速筛选新冠病毒RBD特异性全人源中和性单克隆抗体方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1-S3、采集新冠肺炎康复患者的外周血，分选RBD特异性记忆B细胞，再通过RBD特异性记忆B细胞的mRNA获得抗体可变区cDNA；
S4、构建抗体可变区基因表达盒；
S5、将S4得到的抗体可变区基因表达盒转导入细胞表达抗体并收集上清，筛选RBD特异性单克隆抗体；
S6、将S5得到的RBD特异性抗体上清，检测阻断假病毒感染细胞活性，同时检测上清阻断RBD与ACE2结合能力，双重方法检测单克隆抗体中和能力，筛选RBD特异性中和性单克隆抗体。


2.根据权利要求1所述的快速筛选新冠病毒RBD特异性全人源中和性单克隆抗体方法，其特征在于，S2、首先采用去死细胞染料（DeadDy...

【专利技术属性】
技术研发人员：金艾顺，韩晓建，王应明，胡超，李婷婷，王建为，李胜龙，申美莹，
申请(专利权)人：重庆医科大学，冯玉林，
类型：发明
国别省市：重庆;50