一种棉花花粉发育过程中细胞DNA的荧光标记方法技术

本发明专利技术公开了一种检测棉花花粉母细胞ＤＮＡ物质的荧光标记方法，属于生物技术领域。包括晴天早晨摘取花蕾，样品经不同浓度乙醇逐级下行至蒸馏水；直径小于７ｍｍ的花蕾中的花粉母细胞，置于甘油中渗透２－３ｈ；洗涤后用ＤＡＰＩ避光染色１－２ｈ，细胞内ＤＮＡ物质被标记。直径大于７ｍｍ的花蕾中的成熟花粉粒，加入１０％次氯酸钠水溶液于６０℃水浴中处理１０ｍｉｎ；洗涤后置于０．１－０．２％甘油中渗透２－３ｈ；洗涤后再加入ＤＡＰＩ溶液，静置１０ｍｉｎ后镜检，细胞内ＤＮＡ物质被标记。本发明专利技术具有操作简单、快速，对细胞的损伤小，标记效果好，易观察的优点，将在棉花雄配子体发育过程的研究中发挥重要作用，实际应用价值高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种棉花花粉母细胞DNA物质的荧光标记方法，属于生物
二
技术介绍
植物的小孢子发生到花粉母细胞的成熟的变化过程一直是生殖生物学研究的重要 内容之一。对于棉花小孢子发生和雄配子发育过程的研究从20世纪就开始了，早期的 研究方法主要是石蜡切片法，用苏木精或番红、固绿染色，随后发展到用超薄切片、电 镜观测或离体培养、荧光染色。但直到现在为止，由于这些方法操作复杂，难以快速观 察雄配子体发育的全过程，观察效果不理想。这主要有两方面的原因， 一是实验材料自 身的局限性；二是检测方法的局限性。植物成熟的花粉粒的壁可分为外壁和内壁，外壁主要由孢粉素和纤维素等物质组 成。其中孢粉素是一种难以分解、抗逆性强、耐高温的物质，稳定性强，具有抗强酸、 强碱的特性，它使花粉粒的外壁非常牢固。内壁主要由纤维素和果胶质组成，易被酶类 物质分解。棉属植物的花粉粒成熟时体积较大，直径大约为85-105pm左右，从四分体 释放出来以后，形成一层不透明的结构非常致密的外壁，外壁的自发荧光非常强，使得 染料渗透不到花粉内。因此如果采用染色薄壁花粉粒(如水稻、小麦花粉粒)的方法来 对棉花成熟花粉粒进本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种棉花花粉发育过程中细胞ＤＮＡ的荧光标记方法，包括以下步骤：　１）晴天早晨６－７点间摘取棉花花蕾，剥去苞叶，固定于无水乙醇：冰醋酸配成体积比３∶１的卡诺氏固定液，１２－２４ｈ后转入体积比为７０％的乙醇中，保存于４℃冰箱；　２） 固定好的样品经体积浓度为５０％、３０％、１０％的乙醇逐级下行至蒸馏水；　３）直径小于７ｍｍ的花蕾，用解剖针剥离出其中的花粉母细胞，置于体积比０．１－０．２％的甘油中渗透２－３ｈ；用ｐＨ７－８的磷酸缓冲液洗涤花粉母细胞，将花粉母细胞用０ ．５－１μｇ／ｍｌ的ＤＡＰＩ避光染色１－２ｈ，细胞内ＤＮＡ物质被荧光标记；　４）直径大于７ｍｍ的花蕾，...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：唐灿明，岳洁瑜，吴李君，吴跃进，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]