非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法及其应用，本发明专利技术之非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法，包括以下步骤：(1)引物、探针与重组质粒的设计、合成；(2)采用微滴数字PCR反应，获得定性或定量结果。本发明专利技术之非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法用于非洲猪瘟病毒的检测应用。本发明专利技术根据非洲猪瘟病毒核酸两段保守序列，设计后优选出三对引物和探针，建立非洲猪瘟病毒ddPCR检测方法，其特异性强、灵敏度更高、准确性更高、抗干扰能力更强、重复性更好，并且能有效避免假阴性与假阳性的结果出现；有利于了解和控制非洲猪瘟疫情，也有利于严控非洲猪瘟病死猪肉及猪肉制品在市场上的销售。

【技术实现步骤摘要】
非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法及其应用
本专利技术涉及非洲猪瘟病毒检测方法及其应用，特别地，涉及一种非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法及其应用。
技术介绍
非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起的一种猪的急性、出血性传染病，因其严重危害养猪业，且无有效的疫苗防治，世界动物卫生组织(OfficeInternationaldesEpizooties，OIE)将其列为法定上报传染病，我国列为一类传染病，在国务院办公厅印发的《国家中长期动物疫病防治规划(2012－2020年)》中，非洲猪瘟也是作为13种重点防范的外来动物疫病之一。非洲猪瘟于2007年4月在格鲁吉亚爆发，同年11月，俄罗斯发生首例非洲猪瘟，逐渐蔓延至俄罗斯远东地区，并于2018年在我国蔓延，严重威胁我国养猪业发展，个别省份发生大规模的生猪减产，并存在非洲猪瘟病死猪肉流入市场的风险。随着非洲猪瘟于2018年在我国被发现，至今已在全国形成一定污染面，我国养猪场户防疫意识普遍薄弱，防疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)引物、探针与重组质粒的设计、合成：/n第一组引物、探针与重组质粒：/n上游引物序列F：5'－CAGGCAAAACAAGTGAAACA－3'，下游引物序列R：5'－GCAAACTGCTCATCCAATAT－3'，探针：TGTTCTTCACGC GTAGCGAATGGGC；探针的5'端标记FAM荧光报告基团，3'端标记荧光淬灭基团BHQ1；重组质粒中非洲猪瘟病毒核酸K205序列：CAGGCAA AACAAGTGAA ACACCTAAAA AAAATCCCAC GAATGCAATG TTCTTCACGC GTAGCGA...

【技术特征摘要】
1.一种非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)引物、探针与重组质粒的设计、合成：
第一组引物、探针与重组质粒：
上游引物序列F：5'－CAGGCAAAACAAGTGAAACA－3'，下游引物序列R：5'－GCAAACTGCTCATCCAATAT－3'，探针：TGTTCTTCACGCGTAGCGAATGGGC；探针的5'端标记FAM荧光报告基团，3'端标记荧光淬灭基团BHQ1；重组质粒中非洲猪瘟病毒核酸K205序列：CAGGCAAAACAAGTGAAACACCTAAAAAAAATCCCACGAATGCAATGTTCTTCACGCGTAGCGAATGGGCATCCTCGAAAACTTTTCGAGAAAAGTTTTTAACACCAGAAATTCAGGCCATATTGGATGAGCAGTTTGC；
或替代方案：
第二组引物、探针与重组质粒：上游引物序列F：5'－CTGCTCATGGTATCAATCTTATCGA－3'，下游引物序列R：5'－GATACCACAAGATCRGCCGT－3'，探针：CCACGGGAGGAATACCAACCCAGTG；探针的5'端标记FAM荧光报告基团，3'端标记荧光淬灭基团BHQ1；重组质粒中非洲猪瘟病毒核酸VP72序列：CTGCTCATGGTATCAATCTTATCGATAAATTTCCATCAAAGTTCTGCAGCTCTTACATACCCTTCCACTACGGAGGCAATGCGATTAAAACCCCCGATGATCCGGGTGCGATGATGATTACCTTTGCTTTGAAGCCACGGGAGGAATACCAACCCAGTGGTCATATTAACGTATCCAGAGCAAGAGAATTTTATATTAGTTGGGACACGGATTACGTGGGGTCTATCACTACGGCTGATCTTGTGGTATC；
或替代方案：
第三组引物、探针与重组质粒：上游引物序列F：5'－ATAGAGATACAGCTCTTCCAG－3'，下游引物序列R：5'－GTATGTAAGAGCTGCAGAAC－3，探针：TATCGATAAGATTGAT；探针的5'端标记FAM荧光报告基团，3'端标记荧光淬灭基团BHQ1；重组质粒中非洲猪瘟病毒核酸VP72序列：ATAGAGATACAGCTCTTCCAGACGCATGTTCATCTATATCTGATATTAGCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋晟，
申请(专利权)人：湖南省食品质量监督检验研究院，
类型：发明
国别省市：湖南;43