一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质，所述标准物质以病毒为载体，包裹新型冠状病毒核酸检测的靶标基因。本发明专利技术还公开了一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法，包括：合成靶标基因；将靶标基因分别载入病毒质粒载体；将病毒质粒转化入大肠杆菌进行培养；分离、回收病毒质粒；将病毒质粒转染HEK293T细胞并进行病毒包装；将包装好的病毒颗粒提纯、重悬后，加冻干保护剂分装，经真空冷冻干燥后封装。本发明专利技术具有病毒拟似结构和新型冠状病毒的特异性核酸序列，可以作为新型冠状病毒的标准品实现RNA的绝对定量，并且可以参与从病毒核酸提取到PCR结果读取的全部检测步骤，控制核酸检测结果的准确性。

【技术实现步骤摘要】
一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质及其制备方法
本专利技术涉及一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质及其制备方法，属于生物检测

技术介绍
核酸(DNA或RNA)是病毒的遗传物质，任何物种都有独一无二的核酸序列，所以对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的特征序列进行核酸检测，就可以知道是否感染了新冠病毒。荧光定量PCR技术是目前进行病毒核酸定量检测的主要技术。检测步骤主要包含从病毒中提取基因片段，RNA逆转录为DNA，DNA扩增放大和核酸含量读取。荧光定量PCR技术的直接测量结果是Ct值，即随着检测目标基因的循环复制，每个反应管内的荧光信号累积到达设定的域值时所经历的PCR反应循环数。每个核酸模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。想要将Ct值转换成被测核酸样品的拷贝数，就需要与被测核酸片段一样的标准物质，标准物质中被测核酸片段的含量是已知的、准确的。利用已知起始拷贝数的标准物质作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要通过PCR检测获得被测核酸样品的C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质，其特征是，所述标准物质以病毒为载体，包裹新型冠状病毒核酸检测的靶标基因。/n

【技术特征摘要】
1.一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质，其特征是，所述标准物质以病毒为载体，包裹新型冠状病毒核酸检测的靶标基因。


2.根据权利要求1所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质，其特征是，所述靶标基因为ORF1ab、N基因和E基因。


3.根据权利要求1或2所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质，其特征是，所述病毒载体还包裹内参基因hRNaseP基因。


4.一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法，其特征是，包括：
合成靶标基因；
将靶标基因分别载入病毒质粒载体；
将病毒质粒转化入大肠杆菌进行培养；
分离、回收病毒质粒；
将病毒质粒转染HEK293T细胞并进行病毒包装；
将包装好的病毒颗粒提纯、重悬后，加冻干保护剂分装，经真空冷冻干燥后封装。


5.根据权利要求4所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法，其特征是，所述靶标基因的合成方法为：
对新型冠状病毒的开放阅读框ORF1ab基因、核衣壳N基因、包膜E基因和内参基因hRNaseP基因序列进行修改，使其在5'端和3'端包含随机的终止密码子；
合成上述4种基因并做基因融合，合成4种融合基因片段，分别是ORF1ab基因和hRNaseP基因、E基因和hRNaseP基因、N基因和hRNaseP基因以及单独的hRNaseP基因。


6.根据权利要求4所述的一种病毒形式的新型冠状病毒核酸标准物质的制备方法，其特征是，将靶标基因分别载入病毒质粒载体的方法为：采用GenBuilder™克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：林婧，王尚君，夏雪，徐峰，朱文，
申请(专利权)人：南京市计量监督检测院，
类型：发明
国别省市：江苏;32