NTNG1蛋白在制备用于肝癌诊断试剂或试剂盒中的用途制造技术

本发明专利技术属于细胞生物技术领域，具体公开了一种NTNG1蛋白在制备用于肝癌诊断试剂或试剂盒中的用途。NTNG1蛋白在肝癌细胞系中呈现出比肝正常细胞中的高表达量，说明NTNG1基因的表达水平与肝细胞癌的相关性显著；NTNG1 mRNA在癌组织的表达量高于癌旁组织，说明NTNG1基因及其表达物能够作为肝细胞癌的分子标志物，为肝癌的诊断和靶向治疗提供有效信息；通过结合临床组织样本和细胞实验的结果，表明NTNG1在肝癌的发展过程中扮演着促癌基因的角色。同时，提示NTNG1是一个有前景的肝癌生物标记物和有潜力的治疗靶点。

【技术实现步骤摘要】
NTNG1蛋白在制备用于肝癌诊断试剂或试剂盒中的用途
本专利技术涉及细胞生物
，具体涉及NTNG1蛋白在制备用于肝癌诊断试剂或试剂盒中的用途。
技术介绍
肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC，以下简称肝癌)是全球第六大最普遍的癌症，也是第三大最常见相关死亡原因的癌症。根据2018年的癌症统计数据，全世界每年有841,000新的HCC病例，约55％的HCC患者来自中国。近年来，肝癌也是我国癌症死亡的主要原因之一，其死亡率更高居第2位。由于缺乏有效的临床诊断靶标，且肝癌恶性程度极高，侵袭性强，进展迅速，大部分患者就诊时已达中晚期，即使接受规范的系统治疗，中位OS往往不超过14个月，导致肝癌仍是死亡率最高的消化系统恶性肿瘤。因此，寻找一些准确的生物标志物在肝癌的诊断或预后中具有重要的临床意义。NTNG1位于1号染色体1p13.3区，编码539个氨基酸，由10个外显子组成，长度大约60.5kDa，属于层粘连蛋白相关蛋白Netrin家族的一员。Netrin最早于1990年在秀丽隐杆线虫中发现，Netrins作为一类自分泌蛋白或者膜结合蛋白，可以通过结合不类型受体发挥不同的作用。最初它们在中枢神经系统的发展中起着重要作用，包括调节神经细胞的迁移、分化和凋亡，并稳定血脑屏障，限制免疫细胞进入中枢神经系统。除此之外，Netrins也参与一些非神经组织的黏附、迁移和分化等生理过程，如血管生成、淋巴管形成和炎症等。然而，NTNG1在肝癌组织中的表达情况未见报道。CN201510341113.2公开netrin-1蛋白在制备用于肿瘤治疗的药物中的用途。具体地，公开了netrin-1蛋白在制备用于肿瘤治疗的药物中的用途，肿瘤选自胰腺癌，更优选为胰导管腺癌。对于预防、诊断和治疗胰导管腺癌以及开发治疗胰导管腺癌的药物具有积极意义。但目前关于NTNG1在人原发性肝癌中发生与发展的作用未见报道。
技术实现思路
本专利技术首次检测NTNG1在肝癌组织及配对癌旁组织标本中的表达水平，通过体外及体内试验NTNG1对肝癌增殖、生长、凋亡、侵袭、迁移和小鼠成瘤的影响，为肝癌发生与发展的分子机制提供实验基础，为临床应用提供依据。为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一方面，本专利技术提供一种NTNG1蛋白作为肝细胞癌标志物在制备用于肝癌诊断试剂或试剂盒中的用途。其中，所述肝细胞癌为人原发性肝癌。进一步地，所述肝细胞癌诊断试剂包括特异性识别NTNG1蛋白的抗体或抗体片段。进一步地，所述NTNG1蛋白为肝癌组织或血清或肝癌旁组织中表达的蛋白质。一方面，本专利技术提供一种NTNG1基因或NTNG1基因表达物在制备检测肝细胞癌的组织标志物或血清标志物的制剂中的用途。进一步地，所述检测肝细胞癌的组织标志物或血清标志物的制剂是检测肝细胞癌的组织标志物或血清标志物的试剂盒。进一步地，所述NTNG1过表达后能影响肝细胞癌增殖、生长、凋亡、迁移及侵袭。进一步地，所述NTNG1过表达后导致G0/G1期缩短，细胞快速通过G1/S转换点进入S期，加速细胞周期进程和细胞增殖。进一步地，所述肝癌诊断试剂或试剂盒或制剂中进一步包含一种或多种药用赋形剂或药用载体。另一方面，本专利技术提供一种NTNG1蛋白在制备用于肝癌治疗的药物中的用途，其中，所述肝癌为人原发性肝癌。另一方面，本专利技术提供一种编码NTNG1的RNA或能够特异性识别NTNG1蛋白的特异性抗体在制备用于检测肝癌组织及肝癌旁组织标本中NTNG1表达水平的药物中的用途。另一方面，本专利技术提供一种包含能够在肝癌细胞中抑制NTNG1过表达的药物的组合物，其包含药学上可接受的载体或能够在体内抑制NTNG1过表达的载体。有益效果本专利技术通过实验结果显示，NTNG1蛋白在肝癌细胞系中呈现出比肝正常细胞中的高表达量，说明NTNG1基因的表达水平与肝细胞癌的相关性显著；NTNG1mRNA在癌组织的表达量高于癌旁组织，说明NTNG1基因及其表达物能够作为肝细胞癌的分子标志物，为肝癌的诊断和靶向治疗提供有效信息；NTNG1促进人肝癌细胞体外的增殖和生长；NTNG1过表达后导致G0/G1期缩短，细胞快速通过G1/S转换点进入S期，加速细胞周期进程和细胞增殖；NTNG1促进人肝癌细胞体外的侵袭和迁移；NTNG1促进了人肝癌SMMC7721细胞皮下移植瘤的生长；说明NTNG1在肝癌的发生、发展中起到关键作用，能够用于诊断肝细胞癌，为个体化治疗的选择提供依据，具有重要临床应用价值。本专利技术通过深入研究筛选肝癌发生、发展的关键调控因子NTNG1，并探索其作用分子机制，有助于肝癌的早期诊断与探寻新的治疗方法。NTNG1在肝癌细胞系中的表达高于正常肝细胞系，并且在肝癌患者中癌组织的表达也明显高于邻近的正常肝组织。进一步的细胞实验发现，NTNG1促进了肝癌细胞增殖、迁移和侵袭，抑制肝癌细胞凋亡，提示NTNG1在肝癌中同样发挥癌基因作用。这是首次报道NTNG1在肝癌组织中的表达以及对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。结合临床组织样本和细胞实验的结果，NTNG1在肝癌的发展过程中扮演着促癌基因的角色。同时，提示NTNG1是一个有前景的肝癌生物标记物和有潜力的治疗靶点。因此，本专利技术提供一种用于肝癌诊断的潜在血清学及组织学指标，通过检测NTNG1的试剂来检测NTNG1，进而进行预判。也为肝癌诊断和治疗提供一个潜在靶标，利于临床实践中用于抑制肝癌细胞增殖及迁移。附图说明图1NTNG1在肝癌细胞系中表达。(A)qRT-PCR检测正常肝细胞和肝癌细胞系中和正常肝细胞系NTNG1mRNA的表达水平。(B)westernblot检测肝细胞和肝癌细胞系中肝癌细胞系和正常肝细胞系中NTNG1蛋白的表达水平。(C)NTNG1过表达的HepG2细胞株NTNG1mRNA和蛋白表达水平。(D)NTNG1过表达的SMMC7721细胞株NTNG1mRNA和蛋白表达水平。(E)NTNG1敲低的HepG2细胞株中NTNG1mRNA和蛋白表达水平。(F)NTNG1敲低的SMMC7721细胞株中NTNG1mRNA和蛋白表达水平。数据是3次独立实验的平均值±标准差。图2NTNG1在人肝癌组织中表达。(A)42例配对的HCC组织和癌旁组织中NTNG1mRNA的表达。(B)qRT-PCR检测42例配对的HCC组织和癌旁组织中NTNG1mRNA平均表达水平。(C)westernblot检测42配对的HCC组织和癌旁组织中NTNG1蛋白的表达水平。(D)42例配对的HCC组织和癌旁组织NTNG1蛋白表达所得灰度值的柱状图。数据是3次独立实验的平均值±标准差。图3(A)CCK-8检测NTNG1过表达对细胞增殖能力的影响。NTNG1过表达，HepG2和SMMC7721细胞株的增殖率分别明显升高(P＜0.0001)；(B)CCK8检测NTNG1敲低后对细胞活力的影响。NTNG1敲低后，HepG2和SMMC7721细胞株的增殖率分别明显降本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.NTNG1蛋白作为肝细胞癌标志物在制备用于肝癌诊断试剂或试剂盒中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.NTNG1蛋白作为肝细胞癌标志物在制备用于肝癌诊断试剂或试剂盒中的用途。


2.根据权利要求1所述用途，其特征在于，所述肝细胞癌为人原发性肝癌。


3.根据权利要求1所述用途，其特征在于，所述肝细胞癌诊断试剂包括特异性识别NTNG1蛋白的抗体或抗体片段。


4.根据权利要求1所述用途，其特征在于，所述NTNG1蛋白为肝细胞癌组织或血清或癌旁组织中表达的蛋白质。


5.NTNG1基因或NTNG1基因表达物在制备检测肝细胞癌组织的标志物或血清标志物的制剂中的用途。

【专利技术属性】
技术研发人员：叶甲舟，林燕，梁嵘，马良，余红平，
申请(专利权)人：叶甲舟，
类型：发明
国别省市：广西;45