标准胆固醇分散液及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用作测定脂类含量的标准溶液的含水分溶液，这种分散液具有与血清脂类相似的分散形式和颗粒尺寸。可如下制备此分散液：首先将胆固醇、磷脂、胆汁酸或胆酸盐以及中性类脂和／或胆甾醇酯加入到有机溶剂中，其次从制得的混合物中蒸发掉有机溶剂，并且使得到的类似薄膜的混合物用温度被加热到比卵磷脂的相变温度高的水或缓冲剂溶胀，然后利用一个物理剪切力来分散溶液。由此，可容易地得到一种含有浓度约少于１０００ｍｇ／ｄｌ的胆固醇、相当稳定并可保存一段较长时间的溶液。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一种用作测定脂类含量的标准溶液的水分散液以及这种分散液的制备方法。目前，业已迅速广泛地利用一种近期开发出的酶促测定法来测定体液中的脂类含量，尤其是测定胆固醇的含量，并且这种脂类测定方法在临床诊断领域中用得愈来愈多。因此，需要一种合适的用于测定脂类含量的标准溶液。然而，脂类本质上难溶于水，于是，专门使用那些溶于有机溶剂的脂类标准溶液。因此，这些标准溶液中的脂类在存在状态和流动性方面与体液(例如血清)中的脂类不同。这会导致标准溶液与作为样品的体液(例如血清)之间在反应性上具有较大差异，从而使测定值发生偏差。因此，业已使用来源于人或动物的血清或提纯脂蛋白胆固醇作为标准溶液。例如，在日本专利公开文本No.56-101555中描述了这种纯化脂蛋白胆固醇的方法。然而，在使用血清的方法中，要得到廉价的血清是困难的，同时，未知杂质可能会影响测定值。用于纯化脂蛋白的方法还具有操作复杂的问题。为了改善这些缺陷，业已使用那些用表面活性剂加溶于水的脂类作为标准溶液。然而，需要大量的表面活性剂来使脂类加溶于水。因此，利用此方法制备的溶液的粘度高，并且有时处理起来困难。为了解决这个问题，建议采用表面活性剂和脂类的混合物，其中表面活性剂和脂类的HLB值不同(例如参见日本公开专利文本No.57-84356)。然而，对于利用此方法得到的溶液，在上述的酶促测定方法中，溶液中存在的表面活性剂有时会抑制酶促反应。由于脂类的分散形式与血清中的不同，因此按照此测定方法，这种溶液有时不适于用作标准溶液。如上所述，业已研究出各种利用一个简单的操作过程即可稳定溶解或分散脂类的方法。然而，如上所述脂类的这种分散形式明显不同于血清中的分散形式的事实，有时会造成问题，即阻碍将此溶液用作校正仪器的标准溶液。考虑到这一点，还是利用了用表面活性剂分散脂类的方法。然而，当可以使用表面活性剂时还有一个问题即是不能稳定地分散生理上产生的较高浓度的胆固醇。为了解决上述这些问题，本专利技术的专利技术人进行了深入的研究。结果，发现一种分散液表现出作为胆固醇标准溶液的极好特性，如下制备这种分散液首先将胆固醇、卵磷脂、一种表面活性剂以及一种中性类脂和/或一种胆甾醇酯按一特定的浓度比范围加入到有机溶剂中，其次从制得的混合物中蒸发掉有机溶剂，然后使得到的类似薄膜的混合物用温度被加热到比卵磷脂的相变温度高的水或缓冲液溶胀，最后利用超声辐射分散此溶液而得到这种分散液。本专利技术提供了一种脂类分散液，包括以下组分一种胆汁酸或其盐、用作脂类的一种磷脂、胆固醇以及从胆甾醇脂和中性类脂构成的组合中选择的至少一种组分，还有作为分散介质的水或一种含水溶剂，其中胆汁酸或其盐以及脂类被分散在水或含水溶剂中。本专利技术还提供了一种制备脂类分散液的方法，包括如下步骤首先将胆汁酸或其盐以及脂类溶于有机溶剂中，然后将有机溶剂从得到的溶液中蒸发掉，最后将水或含水溶剂加入到所含的残留的固体中，以便施加一个物理剪切力。施加物理剪切力的步骤最好是在脱氧的气氛下进行的。另外，蒸发有机溶剂的步骤最好是在胆汁酸或其盐以及脂类能溶于有机溶剂的温度下进行。脂类包括一种磷脂、胆固醇以及从胆甾醇酯和中性类脂构成的组合中选择的至少一种组分。在本专利技术的一个实施例中，优选的是将胆固醇亚油酸酯用作胆固醇和胆甾醇酯，将卵磷酯用作磷脂，将牛磺脱氧胆酸钠用作胆酸盐，以及将三硬脂酸甘油酯用作中性类脂。并且较为可取的是胆固醇以及胆甾醇酯的总和与卵磷脂的重量比为1∶1至1∶4，胆酸盐与卵磷脂的重量比为1∶1至1∶20，中性类脂与卵磷脂的重量比为1∶10至1∶5，以及当卵磷脂最后分散于水或缓冲剂中时卵磷脂的浓度不超过1000mg/dl。利用上述方法制备的胆固醇标准溶液具有与在血清脂类相似的分散形式和粒度，并且能提供一种胆固醇和胆甾醇酯的总浓度约少于1000mg/dl的分散液。如此制备的胆固醇分散液相当稳定并且能贮存一段长的时间。从以下结合附图所进行的详细描述中将更好地理解和体会本专利技术(关于构成和内容)以及本专利技术的其它目的和性质，同时所附的权利要求书中特别阐明了本专利技术的这些新颖特性。下面的例子进一步详细说明了本专利技术，但不能认为是对本专利技术范围的限制。例1将60mg胆固醇、90mg用作磷脂的卵磷脂、18mg用作中性类脂的三硬脂酸甘油酯以及4.5mg用作胆酸盐的胆酸钠溶解于1ml用作有机溶剂的2-丙醇中。其次将得到的溶液倒入用旋转蒸发器旋转的玻璃容器(例如试管)中，然后在减压下蒸发2-丙醇。这样，在玻璃容器的内壁上形成了一层胆固醇、卵磷脂、三硬脂酸甘油酯和胆酸钠的均匀混合物薄膜。蒸发2-丙醇以便形成薄膜的步骤是通过向上述溶液中喷入惰性气体(例如氮或氩)进行的，而不是利用旋转蒸发器的真空蒸发。利用这种方式，通过在减压的气氛下蒸发溶剂可阻止在形成薄膜的步骤中磷脂和中性类脂的氧化。将温度被加热到比卵磷脂的相变温度高的水或用作含水溶剂的磷酸盐缓冲剂加入到玻璃容器中，所述薄膜在玻璃容器的内壁上形成并被溶胀。然后，用一超声压碎机辐射超声波，以便施加一个物理剪切力，并且上述的薄膜被分散在水或磷酸盐缓冲剂中。被分散的脂类颗粒的直径取决于超声波的输出和辐射时间。最后，可得到直径大约为50nm的脂类颗粒。在上述施加物理剪切力以便分散薄膜的过程中，还可利用法兰西压碎机取代超声压碎机。在此例中，用作表面活性剂的胆酸钠也可溶于2-丙醇中，从而它能均匀地包含在薄膜中。当胆酸钠不加入2-丙醇溶液中而是在溶胀和分散薄膜的步骤中加入时，不能得到具有理想的颗粒尺寸的溶液。例2将15mg胆固醇、90mg用作磷脂的卵磷脂、45mg用作胆甾醇酯的胆固醇亚油酸酯和4.5mg用作胆汁酸的脱氧胆酸溶于1ml用作有机溶剂的2-丙醇中。通过将得到的溶液倒入玻璃容器(例如试管)中并用与例1中所述相同方式使溶液分散到水或含水溶剂中而得到的含有酯型胆固醇(例如胆固醇亚油酸酯)的胆固醇标准溶液。例3将15mg胆固醇、90mg用作磷脂的卵磷脂、45mg用作胆甾醇酯的胆固醇亚油酸酯、18mg用作中性类脂的三硬脂酸甘油酯和4.5mg用作胆酸盐的牛磺脱氧胆酸钠溶于1ml用作有机溶剂的2-丙醇中。将得到的溶液倒入用旋转蒸发器旋转的玻璃容器(例如试管)中，然后，在减压下蒸发2-丙醇。这样，在玻璃容器的内壁上形成一层胆固醇、卵磷脂、三硬脂酸甘油酯和胆酸钠的均匀混合物薄膜。蒸发溶剂时必需将玻璃容器加热到大约60℃，从而形成一个薄膜。当温度大约在室温时，上述溶液迅速形成白色沉淀。形成薄膜时的温度必须是胆固醇、磷脂、胆甾醇脂、中性类脂和胆酸盐这些溶质都不会沉积和沉淀的温度。因此，必需注意到形成薄膜的最佳温度随溶质的组成以及量的不同而变化的事实。通过将水或缓冲溶液加到利用上述方法形成的薄膜中并用与例1中所述相同的方式进行分散可得到含有酯型胆固醇(例如胆固醇亚油酸酯)和中性类脂(例如三硬脂酸甘油酯)的胆固醇标准溶液。至于利用此方法得到的胆固醇标准溶液的脂类颗粒形式，是具有强疏水性的酯型胆固醇和中性类脂存在于颗粒的中心部分，而磷脂和胆固醇及其存在于外部的亲水性侧链形成脂类颗粒的表面，以便覆盖酯型胆固醇和中性类脂。这种形式与血液中脂类的形式类似。在上述的例子中，卵磷脂用作磷脂，胆固醇亚油酸酯用作胆甾醇脂，三硬脂酸甘油酯(一种甘油三酯本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂类分散液，包括一种胆汁酸或其盐、用作脂类的一种磷脂、胆固醇和从胆甾醇酯和中性类脂构成的组合中选择的至少一种成分，以及用作分散介质的水或含水溶剂，所述胆汁酸或其盐以及所述脂类被分散在所述水或含水溶剂中。２．根据权利要求１所述的脂类分散液，其特征在于磷脂是卵磷脂，并且胆固醇及胆甾醇酯的总和与卵磷脂的重量比为１∶１至１∶４，胆酸盐与卵磷脂的重量比为１∶１至１∶２０，中性类脂与卵磷脂的重量比为１∶１０至１∶５，并且卵磷脂的浓度不超过１，０００ｍｇ／ｄｌ。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：山本智浩，吉冈俊彦，南海史朗，
申请(专利权)人：松下电器产业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]