一种新的多肽——人CDC4类似蛋白12和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人ＣＤＣ４类似蛋白１２，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人ＣＤＣ４类似蛋白１２的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--人CDC4类似蛋白12，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。细胞周期的运转是十分有序的，沿着G1--S--G2--M的顺序进行，这是与细胞周期进行有关的基因有序表达的结果。与细胞分裂有关的基因称为cdc(cell division cycle gene)这些基因的有序表达是受周期中一些检验点或称为调控点调节的。该点的作用是作用于细胞周期转换时序的调控通路，保证细胞周期中的关键事件高度准确的完成。它受制于一系列特异或非特异环境信号的影响，从分子水平看是基于一些基因及其产物对外界信号的反应。细胞周期检验点普遍表现在高等真核生物和酵母细胞中，例如酵母细胞DNA合成前的启动点，高等真核生物G1期中的R点，DNA损伤检验点，DNA复制检验点，G2/M检验点等等。上述的各个检验点保证了产生具有正常遗传性能和生理功能的子代细胞，如果这些调控途径异常，周期不能正常运转和丧失周期关键事件的忠实性，从而导致遗传性能紊乱、增殖分化异常和细胞癌变，甚至导致细胞死亡。嗜糖酿酒裂殖酵母有一个细胞分裂调控基因家族，已发现的有四种::cdc3,cdc4,cdc8,and cdcl2(Nurse,P.,P.Thuriaux,and K.Nasmyth.1976.Mol.& Gen.Genet.146:167-178)。其中细胞分裂周期调控基因(cell division cyclegene,CDC4)已被克隆，它编码一个有141个氨基酸的多肽，这个蛋白与EF-手性蛋白(例如肌球蛋白轻链、钙调蛋白和肌钙蛋白)有相似性，cdc4的缺失会导致细胞质分裂无法完成，从而导致显性的多核细胞的死亡。CDC4蛋白可以形成一个200KD大小的复合物，此复合物可结合于UTP起一定的作用。(J Cell Biol1995 Aug；130(3):651-60)细胞分裂周期调控基因(cell division cycle gene)编码的蛋白是一种细胞分裂周期调控因子--CDC4，但对其结构研究的还不是很清楚，具体请查阅相关文献。(J Mol Biol 1987 May 20；195(2):233-45)从鼠的12天胚胎心脏组织的cDNA文库中克隆到的蛋白经研究证明，细胞分裂周期调控蛋白CDC4与G蛋白betal亚基有一种相似的重复结构，根据它二级结构的高度保守性推测，这一重复结构有特定的功能。(DNA Seq1992；3(4):213-20)周期蛋白依赖激酶(CDK)抑制因子S1C1的降解是细胞周期倚赖性的，S1C1在早G1期是稳定的防止S期CDK早熟活化，在G1期CDK与G1期周期蛋白(cyclin)结合产生一个活化的G1期CDK-cyclin复合物后，磷酸化S1C1，促使后者通过CDC34通路被水解，然后活化的S期CDK，通过磷酸化一些关键底物起始DNA复制。在此通路中，其他几种蛋白如CDC4、CDC53、SKP1等对于S1C1的降解均是十分重要的。(EMBO J.1997 Oct 1；16(19):5966-76.)裂殖酵母的CDC4基因产物在细胞周期的G1晚期向S期过渡中不可缺少的，免疫荧光检验法证明了CDC4基因产物在细胞核中的定位，已有的研究发现，CDC4基因产物是细胞核骨架的重要组分蛋白，但CDC4基因产物的具体功能还有待进一步研究。(Biochem Biophys Res Commun 1990 Nov 15；172(3):1324-30)有丝分裂细胞周期的突变的cdc4基因，会阻遏核DNA复制的起始、复制后纺锤体的分离。在减数分裂中，cdc4基因也有极其重要的作用。(Genetics1977May；86(1):57-72)SEL-10也属于CDC4蛋白家族，在对线虫的研究中发现，SEL-10是lin-12/Notch调控信号的负调控因子，SEL-10可以提高泛素刺激的lin-12/Notch调控信号，从而SEL-10可以调控lin-12/Notch的活性，并可以间接的调控肿瘤的发生。(Genes Dev 1997 Dec1；11(23):3182-93)SEL-10与SEL-12结合在一起形成复合物调控presenilin基因水平的调节。Presenilin基因包括PS1和PS2，它们的突变会导致人的Alzheimer氏综合症。(Proc Natl Acad Sci U S A 1998 Dec 22；95(26):15787-91)通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本专利技术的多肽的表达谱与人CDC4类似蛋白13的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人CDC4类似蛋白12。由于如上所述人CDC4类似蛋白12蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人CDC4类似蛋白12蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人CDC4类似蛋白12蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--人CDC4类似蛋白12以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人CDC4类似蛋白12的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码入CDC4类似蛋白12的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人CDC4类似蛋白12的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--人CDC4类似蛋白12的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--人CDC4类似蛋白12的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人CDC4类似蛋白12异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中103-444位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1075位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人ＣＤＣ４类似蛋白１２，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]