一种新的多肽——人间隙连接蛋白10和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人间隙连接蛋白１０，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人间隙连接蛋白１０的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--人间隙连接蛋白10，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。在组织中，细胞之间能够通过特定的胞间通道分享离子、第二信使和小的代谢产物，称为间隙连接。实现这种功能的连接子由一种完整的膜蛋白的六聚体组成，这种膜蛋白通常称为间隙连接蛋白(Cx)，一个通道包含了分别位于两个细胞上的两组六聚体连接蛋白装配而成。间隙连接蛋白家族是一个相互联系的多基因家族，在一个特定的种内，虽然结构上相似，但还存在着许多差异以及组织特异性。在结构上，单条连接蛋白由一个较短的细胞质N-末端区域，中间肽段弯曲折叠成四个跨膜区段以及两个胞外、一个胞内的环结构，C-末端也位于细胞质中，并且不同的连接蛋白之间长度有非常大的差异，从20个氨基酸残基(Cx26)至260个氨基酸残基(Cx56)不等，整个构象呈不规则的W状。间隙连接蛋白家族各个蛋白之间的相似程度约50％-80％，不同之处主要是位于细胞质内的C-末端区域，不管是氨基酸长度还是氨基酸序列都有很大的差异。位于细胞膜外的两个环非常保守，每个环包含了三个Cys残基，通过形成二氧化硫键来实现细胞与细胞之间的连接。两段环结构的保守序列如下(1)C--T-X-Q-P-G-C-X(2)-V-C-Y-D；(2)C-X(3,4)-P-C-X(3)---C-----P。胞外部位的相似性有助于细胞之间的紧密粘连，而胞内部分的特异性有助于对穿过通道的小分子物质进行必要的选择，避免一些不需要的或有害的物质的侵入。间隙连接形成的跨膜通道实现了小分子的从一个细胞向邻近细胞的扩散，并且实现最合理的物质分配，各取所需。这种细胞间物质的交流有助于调节细胞的活性，包括细胞生长的调节、细胞分化的调节等。细胞粘连后代谢能力也会发生变化，连接蛋白还能作为某些代谢途径中涉及酶的体细胞突变的抑制剂。细胞膜上酪氨酸激酶受体的激活能抑制间隙连接的胞间交流，比如肝细胞生长因子，其表面含有酪氨酸激酶受体，能够抑制角化细胞的连接。PTA，一种促肿瘤生长的因素，也能对胞间交流起抑制作用。在人体内，细胞之间物质交流与各种组织器官肿瘤有极为密切的关系，比如乳腺癌、上皮细胞癌、肝细胞癌、人造骨细胞癌等等。Cx43和Cx32在正常肝细胞中大量表达，但在肝细胞癌发生部位，Cx32的表达状况明显弱于其周围非肿瘤区，证明细胞之间的连接受到了影响，使致癌物质的活性明显下降。另外还发现，妇女怀孕期间和分娩时Cx43的表达也会增加。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本专利技术的多肽的表达谱与人间隙连接蛋白9的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人间隙连接蛋白10。由于如上所述人间隙连接蛋白10蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人间隙连接蛋白10蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人间隙连接蛋白10蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--人间隙连接蛋白10以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人间隙连接蛋白10的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人间隙连接蛋白10的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人间隙连接蛋白10的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--人间隙连接蛋白10的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--人间隙连接蛋白10的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人间隙连接蛋白10异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中414-677位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-3377位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人间隙连接蛋白10蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人间隙连接蛋白10蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人间隙连接蛋白10表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人间隙连接蛋白１０，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]