一种新的多肽--迪乔治综合症关键区域2-16.06和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－ＤｉＧｅｏｒｇｅ综合症关键区域２－１６．０６，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如ＤｉＧｅｏｒｇｅ综合症、胚胎发育紊乱症、生长发育障碍性疾病、炎症、免疫性疾病、各种肿瘤等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的ＤｉＧｅｏｒｇｅ综合症关键区域２－１６．０６的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——DiGeorge综合症关键区域2-16.06，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。DiGeorge综合症(DGS)是一种先天性疾病，患者的第三和第四咽囊发育缺陷导致胸腺和甲状旁腺发育不全，常伴随着先天性心脏缺损、大血管异常、食管闭锁和面部结构异常(Greenberg，F.，Elder，F.F.B.et al.，1988)。DiGeorge综合症关键区域2(DGCR2)在神经脊细胞迁移中起作用，该迁移过程在DiGeorge综合症中发生异常，因此，DGCR2是导致DiGeorge综合症的关键基因。DGCR2蛋白由BF1-2EN/BF1-05EB cDNA编码，其较长的开放阅读框编码含有550个氨基酸的蛋白，在-1位置处含有一个终止密码子，恰好处于起始密码子Met之前，5’非编码尾巴长为147Bp，3’非编码尾巴长为2.6Kb，含有一个潜在的多聚腺嘌呤信号。完整的DGCR2蛋白约61KDa，表现较强的亲水性。最前面的24个氨基酸(-24—-1残基)具有信号肽的特点，表现疏水性特征，在-1(Leu)和-3(Glu)处终止(Dalbey，R.E.，and von Heijne，G.，1992)。信号肽断裂后，成熟的多肽含有526个氨基酸(58KDa)，不带电荷，主要表现疏水性，第326-344残基处于蛋白跨膜区域。N末端(4-42)规则地含有6个Cys残基，被7个其它的氨基酸分隔，这种类型的重复结构也在许多其它的哺乳动物蛋白中找到，该类蛋白通常都与免疫系统、宿主防御反应(人补体C9、人补体因子1)、脂质代谢(低密度脂蛋白受体、巨噬细胞清除受体、LDL受体相关蛋白)和基底膜相关。第91-217残基形成一个区域，与人B细胞分化抗原(Lyb-2)的C-型植物凝集素区域相似，C-型植物凝集素是一种钙依赖的碳水化合物结合蛋白，涉及细胞之间的粘附作用。DGCR2蛋白的细胞外部分富含Cys残基，能够形成二硫键桥，对于蛋白的二级结构起着决定性作用。DGCR2蛋白的C末端(胞质区域，第345-526残基)是酸性的，并且富含Pro，含有两段相同的DPPPPYXA序列，被10个氨基酸分隔。DGCR2基因涉及CATCH22表型的发病机制，CATCH22是心脏的缺陷、胸腺发育不全、腭裂、低钙血、染色体22q11缺失一类先天性疾病的总称。在所有的CATCH22病症中，DGCR2都是半合子状态的，产生缺失。另外，DGCR2基因还涉及ADU断点，一些不同的机制都证明了它与ADU的病理学机制直接相关。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与DiGeorge综合症关键区域2的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为DiGeorge综合症关键区域2-16.06。由于如上所述DiGeorge综合症关键区域2-16.06蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的DiGeorge综合症关键区域2-16.06蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新DiGeorge综合症关键区域2-16.06蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——DiGeorge综合症关键区域2-16.06以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码DiGeorge综合症关键区域2-16.06的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码DiGeorge综合症关键区域2-16.06的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产DiGeorge综合症关键区域2-16.06的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——DiGeorge综合症关键区域2-16.06的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——DiGeorge综合症关键区域2-16.06的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与DiGeorge综合症关键区域2-16.06异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中9-449位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-456位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制DiGeorge综合症关键区域2-16.06蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与DiGeorge综合症关键区域2-16.06蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于DiGeorge综合症关键区域2-16.06表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－ＤｉＧｅｏｒｇｅ综合症关键区域２－１６．０６，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]