一种新的多肽--人细胞周期蛋白K11.77和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人细胞周期蛋白Ｋ１１．７７，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如胚胎发育畸形、肿瘤、糖尿病、月经失调、消化性溃疡、心律失常、贫血、癫痫等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人细胞周期蛋白Ｋ１１．７７的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人细胞周期蛋白K11.77，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。真核细胞的发育取决于依赖蛋白激酶家族(CDK)的细胞周期蛋白在合适的时间活化(Norbury，C.Nurse，P.(1992).Animal cell cycles and their control.Ann.Rev.Bio ch em.61，441-470)。CDK家族成员有同源序列，该序列包括在所有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶中发现的氨基酸残基亚型，这些氨基酸残基是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性所必须的(Meyerson，M.，et al.，&Tsai，L.，H.(1992).A familyof human cdc2 related protein kinases.EMB O J.11，2909-2917)。CDKs通过与正向调节分子结合而被激活，这个正向调节分子叫细胞周期蛋白。细胞周期蛋白取名来自于它们的细胞周期性积累和破坏，这些变化是和海洋脊椎动物和两栖动物胚胎卵裂和分化伴随产生的。细胞周期蛋白的序列是非常多样性的，只有大约100个氨基酸区域处是同源的，这个区域现在定义为细胞周期蛋白盒(Pines，J.&Hunter，T.(1989).Isolation of a human cyclin cDNAEvidence forcyclin mRNA and protein regulation in the cell cycle and for interactionwith p34cdc2Cell 58，833-846)。在高等真核生物中，按照序列的相似形和在细胞周期中出现的时间，到目前为止细胞周期蛋白分为11个家族(A-K)(Hunter，T.&Pines，J.(1994).Cyclins and cancer 11Cyclin D and CDKinhibitors come of ate.Cell 79，573-582)。细胞周期蛋白K基因编码一个由357个氨基酸残基组成的蛋白质，该蛋白与细胞周期蛋白C和H最相关，细胞周期蛋白C和H通过连接和激活依赖细胞周期蛋白激酶(Cdks)磷酸化RNA聚合酶II的C末端结构域(CTD)来调节基本的转录。细胞周期蛋白K的mRNA广泛表达于成熟小鼠和人的精巢中，但在成人精巢和卵巢中正在发育的生殖细胞中表达最多。细胞周期蛋白K在体内与CTD激酶和Cdk激酶连接在一起，并且与RNAPII共免疫沉淀。因此，细胞周期蛋白K是转录细胞周期蛋白家族中一个新的成员，并且在调节Cdk和RNAPII中起着双重作用(Michael C.Edwards，Calvin Wong，Stephen J.Elledge(1998)Mol.Cell.Biol18(7)，4291-4300)。在细胞周期蛋白折叠区域里，有22个氨基酸残基是一致的。这些氨基酸残基存在于N末端的细胞周期盒折叠内。有的起结构支撑作用，有的暴露在外形成两个显著的表面簇。一个表面簇是CDK2与细胞周期蛋白A的结合位点的一部分(Jeffrey，P.D.，etal.，&Pavletich，N.(1995).Mechanism of CDK activationrevealed by the structure of a cyclinA-CDK2 complex.Nature 376，313-320)，另一个表面簇也是一个细胞周期蛋白的反应位点。精氨酸211和天门冬氨酸240形成一个显著的存在于疏水环境含有保守离子对的结构，该疏水环境是由周围的氨基酸残基酪氨酸199，丙氨酸212，亮氨酸214，缬氨酸215，缬氨酸236，异亮氨酸239，亮氨酸243，亮氨酸341，丙氨酸344和亮氨酸348。这些氨基酸残基在很多细胞周期蛋白里都是保守的疏水氨基酸，这表明该区域对于维持结构的稳定性起着至关重要的作用。精氨酸211的胍基团可以通过氢键与位于C末端转角2’的主链丝氨酸340和亮氨酸341的羧基基团发生结构域内部接触，这表明该残基可能对结构域之间的稳定起一定作用。细胞周期蛋白盒折叠区域还广泛存在于各种调节分子，大多数是一些重要的转录因子，例如TFIIB和肿瘤抑制基因产物pRB的B口袋结构和相关蛋白，p107。通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本专利技术的多肽的表达谱与人细胞周期蛋白K的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人细胞周期蛋白K11.77。由于如上所述人细胞周期蛋白K11.77蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人细胞周期蛋白K11.77蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人细胞周期蛋白K11.77蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人细胞周期蛋白K11.77以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人细胞周期蛋白K11.77的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人细胞周期蛋白K11.77的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人细胞周期蛋白K11.77的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人细胞周期蛋白K11.77的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人细胞周期蛋白K11.77的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人细胞周期蛋白K11.77异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中1643-1966位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-3425位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人细胞周期蛋白K11.77蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人细胞周期蛋白Ｋ１１．７７，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]