免疫学诊断蛋白芯片制备方法技术

本发明专利技术公开了一种免疫学诊断蛋白芯片及其制备方法。蛋白芯片是在玻片、硅片、膜、高分子材料载体上固定ＣＤ１，ＣＤ２等５～２００种特异性单克隆抗体及其阳性和阴性对照，它是将单克隆抗体用化学方法固定于经过戊二醛或多聚赖氨酸或小牛血清蛋白或亲和素处理过的载体上。本发明专利技术可同时检测免疫白细胞的表面抗原分型及多种蛋白表达水平。具有快速，准确，平行，多重分析特点，该芯片可用于免疫系统疾病诊断和白血病分型及蛋白表达研究。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学诊断，尤其涉及一种。现行的生物芯片一般为基因芯片。蛋白质的固定难度大、蛋白芯片的制备工艺复杂、成本昂贵。蛋白芯片目前都是以膜为介质，如PVDF膜，NC膜，不易操作。现有的检测特异蛋白的技术，如ELISA，放射免疫方法，Westernblot，存在操作繁杂，所需时间长，同位素污染等。本专利技术的目的是提供一种大规模集成化，工艺简单，准确定位，快速反应，且价格低廉，并能平行，多重分析的。为了达到上述目的，本专利技术采取下列措施；免疫学诊断蛋白芯片是在玻片、硅片、膜、高分子材料载体上固定特异性单克隆抗体，所说的特异性单克隆抗体为CD1，CD2，CD3，CD4，CD5，CD7，CD8，CD10，CD13，CD14，CD16，CD19，CD22，CD23，CD25，CD34，CD38，CD41，CD56，及阳性和阴性对照Kappa，Lambada，MPO，NSE，NK cell marker，plasma cell marker，β-Tubulin和BSA。免疫学诊断蛋白芯片的制备方法是将0.1～10ng CD系列单克隆抗体用1～100μl的0.1～1.0M包含羟基和胺基的双官能团化合物加0.05～0.5M醋酸盐或磷酸盐混合液点样于用戊二醛或多聚赖氨酸或小牛血清蛋白或亲和素处理过的玻片、硅片、膜、高分子材料载体上，室温过夜后，用1～100μl的0.1～1.0M包含羟基和胺基的双官能团化合物加0.05～0.5M醋酸盐或磷酸盐混合液室温封闭0.5～4小时，用0.01～0.1M PB缓冲液冲洗干燥，0～4℃保存待用。本专利技术的免疫学诊断蛋白芯片是在玻片、硅片、膜、高分子材料载体上用高密度阵列点样仪形成蛋白微阵列，用荧光标记的蛋白与固定在载片上的抗体发生特异结合反应，用荧光扫描方法检测免疫信号，因此可同时检测多种蛋白及蛋白表达(见附图说明图1)。具有快速，准确，平行，多重分析特点，检测时间可缩短至2小时内完成。该芯片可用于免疫系统疾病诊断和白血病分型及蛋白表达研究。下面结合附图和实施例对本专利技术作详细说明。图1是免疫学诊断蛋白芯片示意图；图2是CD系列单克隆抗体蛋白芯片阵列图；图3是免疫学诊断蛋白芯片结果图。实施例1材料与方法a.CD系列单克隆抗体CD1，CD2，CD3，CD4，CD5，CD7，CD8，CD10，CD13，CD14，CD16，CD19，CD22，CD23，CD25，CD34，CD38，CD41，CD56，及阳性和阴性对照Kappa，Lambada，MPO，NSE，NK cell marker，plasma cell marker，β-Tubulin和BSA。b.细胞株HL-60，K562，Jurkat，NB4培养细胞的膜蛋白抽提与荧光标记所有培养细胞将细胞数调整到2×107，用2％TritonX-114抽提膜蛋白，用终浓度为5ug/ml FITC(fluorescein isothiocyante)，或终浓度为2.5ug/ml FSE(fluoresceinsuccinimidyl ester)标记膜蛋白，标记反应在室温为一小时，用透析或离心法去除游离的荧光素。CD系列单克隆抗体的固定将CD系列单克隆抗体1μl(10ng)与1μl的0.5M胺基乙醇加CCB(cyanoborohydride coupling buffer)加0.1M醋酸钾混合液混合按一定的格式用阵列点样仪点于胺基或多聚赖胺酸处理的玻璃载片上(见图2)，40ng的BSA为阴性对照，室温过夜后，用2μl的0.5M胺基乙醇加CCB(cyanoborohydridecoupling buffer)加0.1M醋酸钾混合液室温封闭1小时，0.01M PBS缓冲液冲洗干燥，4℃保存待用。免疫反应及信号扫描取10μl荧光标记的膜蛋白于CD蛋白芯片上，室温1小时，水冲洗干燥。荧光扫描，并采用软件分析图像结果。CD系列单克隆抗体阳性为绿色荧光点，阴性无荧光点(见图3)。权利要求1.一种免疫学诊断蛋白芯片，其特征在于在玻片、硅片、膜、高分子材料载体上固定特异性单克隆抗体，所说的特异性单克隆抗体为CD1，CD2，CD3，CD4，CD5，CD7，CD8，CD10，CD13，CD14，CD16，CD19，CD22，CD23，CD25，CD34，CD38，CD41，CD56，以及阳性和阴性对照Kappa，Lambada，MPO，NSE，NK cell marker，plasma cell marker，β-Tubulin和BSA。2.根据权利要求1所述的免疫学诊断蛋白芯片，其特征在于所说的玻片、硅片、膜、高分子材料载体上固定有5～200个针对白细胞表面分化簇类抗原的特异性CD单克隆抗体。3.一种免疫学诊断蛋白芯片的制备方法，其特征在于将0.1～10ng CD系列单克隆抗体用1～100μl的0.1～1.0M包含羟基和胺基的双官能团化合物加0.05～0.5M醋酸盐或磷酸盐混合液点样于用戊二醛或多聚赖氨酸或小牛血清蛋白或亲和素处理过的玻片、硅片、膜、高分子材料载体上，室温过夜后，用1～100μl的0.1～1.0M包含羟基和胺基的双官能团化合物加0.05～0.5M醋酸盐或磷酸盐混合液室温封闭0.5～4小时，用0.01～0.1M PBS缓冲液冲洗干燥，0～4℃保存待用。4.根据权利要求3所述的一种免疫学诊断蛋白芯片的制备方法，其特征在于将CD系列单克隆抗体0.1～10ng与1～100μl的0.1～1.0M胺基乙醇加cyanoborohydride coupling buffer加0.05～0.5M醋酸钾混合液混合点样于用戊二醛或多聚赖氨酸处理过的载体上，室温过夜后，用1～100μl的0.1～1.0M胺基乙醇加cyanoborohydride coupling buffer加0.05～0.5M醋酸钾混合液室温封闭0.5～4小时，用0.01～0.1M PBS缓冲液冲洗干燥，0～4℃保存待用。全文摘要本专利技术公开了一种。蛋白芯片是在玻片、硅片、膜、高分子材料载体上固定CD1,CD2等5～200种特异性单克隆抗体及其阳性和阴性对照,它是将单克隆抗体用化学方法固定于经过戊二醛或多聚赖氨酸或小牛血清蛋白或亲和素处理过的载体上。本专利技术可同时检测免疫白细胞的表面抗原分型及多种蛋白表达水平。具有快速,准确,平行,多重分析特点,该芯片可用于免疫系统疾病诊断和白血病分型及蛋白表达研究。文档编号G01N33/68GK1351259SQ0013379公开日2002年5月29日 申请日期2000年10月31日 优先权日2000年10月31日专利技术者杨梦甦 申请人:杨梦甦 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫学诊断蛋白芯片，其特征在于在玻片、硅片、膜、高分子材料载体上固定特异性单克隆抗体，所说的特异性单克隆抗体为：ＣＤ１，ＣＤ２，ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ５，ＣＤ７，ＣＤ８，ＣＤ１０，ＣＤ１３，ＣＤ１４，ＣＤ１６，ＣＤ１９，ＣＤ２２，ＣＤ２３，ＣＤ２５，ＣＤ３４，ＣＤ３８，ＣＤ４１，ＣＤ５６，以及阳性和阴性对照：Ｋａｐｐａ，Ｌａｍｂａｄａ，ＭＰＯ，ＮＳＥ，ＮＫ ｃｅｌｌ ｍａｒｋｅｒ，ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌ ｍａｒｋｅｒ，β－Ｔｕｂｕｌｉｎ和ＢＳＡ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨梦甦，
申请(专利权)人：杨梦甦，
类型：发明
国别省市：HK[中国|香港]