一种新的多肽--人细胞色素b5-9.35和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人细胞色素ｂ５－９．３５，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人细胞色素ｂ５－９．３５的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人细胞色素b5-9.35，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。细胞色素是一组具有色素的蛋白质，在细胞的电子转运过程中充当电子载体。这些蛋白把来自糖类，脂肪以及其他食物代谢而来的高能电子转变为ATP，驱动细胞多种需要能量反应的能量主要来源。细胞色素因血红素结合基团而彼此相关，该基团由包含紧密结合一个铁原子的卟啉环构成。铁原子作为真正意义上的电子载体，在接受一个电子时由铁变为亚铁。细胞色素从诸如NADH或是FADH2亚基的底物中接受电子，然后把它们传给类似细胞色素或泛素等其他电子载体。细胞色素根据吸收光谱鉴别因其与血红素基团的作用不同被分为亚组a，b，c。细胞色素a，a3亚基，b562亚基，b566亚基，c以及c1亚基都是哺乳动物中参与氧化磷酸化的线粒体膜呼吸链的成分。细胞色素b5家族包括各种蛋白的血红素结合域。一系列氧化还原酶的结构由与b5的血红素结合域同源的血红素结合域及黄素脱氢酶或一个钼蝶呤域并列构成。在哺乳动物中已被发现的成员有两个细胞色素b5及亚硫酸盐氧化酶。细胞色素b5被发现在线粒体和内质网中以膜结合形式存在，在红细胞中以可溶形式存在。膜结合形式与脂类 药物代谢以及涉及NADPH的羟基化反应有关，作为几种膜结合加氧酶的电子载体起作用。不同哺乳动物来源，包括来自人，马，鼠，兔，猪的细胞色素b5由一条约含135个氨基酸的多肽单链构成，该单链折叠成两个结构独立的区域。N-端域约1-96个氨基酸残基是一个极性催化域，血红素基团与之非共价结合，行使催化功能的主要是30-96位氨基酸。C-端疏水域，约自第96个残基至末端，是膜结合域，它把多肽链固定于线粒体膜上。人细胞色素b5的可溶形式缺乏C-端膜结合域。在哺乳动物中，血红素结合域是高度保守的，约有84％的相似性，而哺乳动物与鸟类在这一区域约有69％的相似性。b5有两种同源形式，一种在微粒体中发现，一种在线粒体外膜中发现。其中有两个丝氨酸残基作为血红素基的轴配体。亚硫酸盐氧化酶，由钼蝶呤域及血红素结合域构成，位于线粒体膜间区，催化含硫氨基酸的氧化降解中的末端反应，并把细胞色素c作为生理电子受体。该蛋白是一种分子量为115KD的二聚体，每个单体中含有一个作为辅基的钼原子及一个血红素。此外，细胞色素b5家族种的已知成员还包括酵母的乳酸脱氢酶，真菌，植物以及细菌的硝酸还原酶，果蝇肌蛋白TU-36B，裂殖酵母假拟蛋白SpAC1F12.10c，酵母假拟蛋白YMR073c，酵母假拟蛋白YMR272的血红素结合域。我们用包括两个组氨酸血红素配体中第一个配体的一段片段作为细胞色素b5家族血红素结合域的特征模板序列--x(2)-H-P--G。含有上述特征序列模板的多肽或该多肽的拮抗剂，激动剂及抑制剂可用于诊断 预防及治疗癌症肌肉方面的疾病以及发育紊乱。通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本专利技术的多肽的表达谱与人细胞色素b5-的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人细胞色素b5-9.35。由于如上所述人细胞色素b5-9.35蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人细胞色素b5-9.35蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人细胞色素b5-9.35蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人细胞色素b5-9.35以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人细胞色素b5-9.35的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人细胞色素b5-9.35的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人细胞色素b5-9.35的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人细胞色素b5-9.35的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人细胞色素b5-9.35的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人细胞色素b5-9.35异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中309-566位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-929位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人细胞色素b5-9.35蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人细胞色素b5-9.35蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人细胞色素b5-9.35表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人细胞色素ｂ５－９．３５，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]