产前诊断早产、胎儿感染和胎儿损伤的诊断剂及含有它们的诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种产前诊断早产、胎儿感染和胎儿损伤的方法，和诊断用的诊断剂体系和诊断试剂盒。方法、诊断剂体系和试剂盒是基于这个发现，即当孕妇处于早产、子宫内感染和胎儿损伤的危险中时，羊水中ＭＭＰ－８的水平明显较高。诊断剂体系和试剂盒可用于不具有以及具有早产或胎膜早熟破裂的临床信号的患者。由于与测量胎血细胞因子水平的常规方法相比，在灵敏度和特异性方面的优势以及它较小的侵袭力，该诊断剂体系和试剂盒在早产、胎儿感染和胎儿损伤的产前诊断方面是非常有用的。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种产前诊断早产、胎儿感染和胎儿损伤的诊断剂体系，和一种利用该试剂的诊断试剂盒，更具体地，涉及羊水基质金属蛋白酶-8(MMP-8)浓度作为早产、胎儿感染和胎儿损伤的产前诊断标记的应用。
技术介绍
在医学界很久以来就公认对早产或胎膜早熟破裂的预防比其出生后的治疗更有意义。然而，目前已知很多因素引起早产或胎膜早熟破裂，使得难以预防这种不希望的事件。传统预防早产的方法是鉴定高危群的妇女，基于产科学和妇产科学、人口统计学和各种综合征的知识，应对她们特别关注(Main等，Am.J.Obstet.Gynecol.，151892-898，1985)。然而，该方法具有既不灵敏又不特异的问题。为防止该问题，大量的研究针对于寻找生化标记来预测即将发生的早产和胎膜早熟破裂，使得血浆雌二醇-17β，孕酮，C-反应性蛋白成为有前途的候选物。然而，发现这些候选物的精确度很差。除了这类生化预测标记外，如对胎膜早熟破裂的研究所揭示，基于绒膜由纤维结缔组织组成和纤维结缔组织抗张强度由它的胶原含量确定的事实，已有效关注胶原的生化作用。基于他们的发现，即与正常膜相比，早熟破裂的胎膜具有低的胶原含量，一些科学家推断胎膜的早熟破裂归因于比正常胎膜低的抗张强度(Obstet.Gynecol.，57487-89，1981)。根据另一项研究，报道了在早熟破裂的胎膜和早产中胶原酶的血清活性是高的(Obstet.Gynecol.，7584-88，1990)。然而，尚未阐明这种生化变化的精确机制(FEBBS Letters，244(2)315-318，1989)。在统计学上，估计妊娠37周前早产的频率为约8-10％。在韩国，每年约50,000个婴儿早产。早产通常引起一系列的新生儿并发症，包括脓毒症，呼吸窘迫综合征，肺炎，支气管肺发育异常，脑室内出血，坏死性小肠结肠炎和大脑性麻痹。越早早产，这种后遗症的频率就越高，严重性就越大。因此，如果能防止早产，则可能显著降低被这类疾病致残的早产儿的诞生。近来的报道揭示至少30-40％的早产与子宫内感染有关(Butler NR.，Bonham DG.，Prenatal mortality.The first report of the British perinatalmortality survey，Edinburgh，Churchill Livingstone，115-145，1963；RomeroR.，Avila C.，Sepulveda W.，Preterm birth.Cause，prevention，andmanagement.，McGrow-Hill Company，97-136，1993；Romero R.，Mazor M.，Clin.Obstet.Gynecol.，31553，1990；Gibbs RS.，Romero R.，Hiller SL.，等，Am.J.Obstet.Gynecol.，1661515，1992)。子宫内感染可通过下述过程对胎儿造成伤害。子宫内感染活化了母体和胎儿的免疫系统，以分泌炎性介质，如来自淋巴细胞的细胞因子和来自中性粒细胞的MMP(基质-金属蛋白酶)。当炎性介质达到一定水平时，促进子宫收缩的前列腺素就产生了，其引起导致早产的主动分娩。另外，升高的炎性介质水平导致胎儿受到胎儿炎性反应综合征(FIRS)的侵袭。由于成年人的自身免疫性疾病，炎性介质引起脓毒症或急性呼吸窘迫综合征或损害器官，同样，胎儿的全身器官被炎性介质伤害，导致脑白质损伤和支气管发育异常。因此，炎性介质的产前诊断对于预防早产和胎儿损伤是必需的。通常，当前使用的子宫内胎儿感染的产前诊断方法是cordocentesis-即测量胎儿的血细胞因子水平，和脐带的组织检查以鉴定脐带炎(funisitis)。然而，由于它的侵袭力，cordocentesis的应用受到限制，并且脐带炎仅能在分娩后诊断(Yoon BH.，Romero R.，Park JS.，Kim CJ.，ChoiJH.，Han TR.，Am.J.Obstet.Gynecol.，182675-81，2000；Yoon BH.，Romero R.，Kim KS.，Park JS.，Ki SH.，Kim BI.，Jun JK.，Am.J.Obstet.Gynecol.，181773-9，1999；Romero R.，Gomez R.，Ghezzi F.，Yoon BH.，Mazor M.，Edwin SS.，Berry SM.，Am.J.Obstet.Gynecol.，179186-93，1998)。当感染或羊膜腔发炎时，羊水中的白细胞数增加。羊水中的中性粒细胞被认为是来源于胎儿的(Knauper V.，Kramer S.，Reinke H.，TschescheH.，Eur.J.Biochem.，189295-300，1990；Blaser J.，Triebel S.，Massjosthusmann U.，Romisch J.，Krahl-Mateblowski U.，Freudenberg W.，Fricke R.，Tschesche H.，Clinic.Chim.Acta.，24417-33，1996；Segura-ValdezL.，Pardo A.，Gaxiola M.，Uhal BD.，Becerril C.，Selman M.，Chest..，117684-94，2000；RomanelliR.，Mancini S.，Laschinger C.，Overall CM.，Sodex J.，MaCulloch CA.，Infect.Immun.，672319-26，1999；Maymon E.，Romero R.，Pacora P.，Gomez R.，Athayde N.，Edwin S.，Yoon BH.，Am.J.Obstet.Gynecol.，18394-9，2000)。因此，推定羊水中中性粒细胞的分泌产物可能反映了胎儿炎性反应。在本专利技术中，关注羊水中MMP-8的水平。羊水中MMP-8的测定可以是胎儿炎性反应综合征的标记，该综合征目前可通过分娩后脐带的组织学检查或用cordocentesis测定胎儿血细胞因子来诊断。MMP(基质金属蛋白酶)系列，也全体被称为matrixin，是依赖锌的内肽酶，它们负责降解胞外基质蛋白。这些蛋白酶组成一个大且增长的蛋白家族，这些蛋白具有相似的结构和酶性质。MMP被广泛分为五组。连同MMP-1和MMP-13一起，MMP-8属于间质胶原酶组。MMP-8在大小上与其它间质胶原酶相似，但在很大程度上被糖基化。当完全糖基化时，MMP-8的酶原形式具有85kDa的分子量。酶原去掉15-25kDa片段转化成60-70kDa的活性形式。原MMP-8在体外被各种蛋白酶激活，包括胰岛素，胰凝乳蛋白酶和组织蛋白酶G。同样发现有机汞制剂化合物也激活原MMP-8。尚未完全阐明MMP-8的体内活化机制。涉及MMP-8的现有技术存在于美国专利号5,736,341中，其公开了基于对MMP-8的单克隆抗体，能敏感且特异地诊断牙周疾病的方法和测试试剂盒。在该专利中描述了在口腔中MMP-8水平的测量能定点特异诊断牙周炎，因为MMP本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种产前诊断早产，胎儿感染和胎儿损伤的方法，其包含下述步骤： １）取孕妇的羊水样品；和 ２）测量羊水样品中基质金属蛋白酶－８的水平。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹保铉，
申请(专利权)人：财团法人索尔大学校产学协力财团，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]