一种多肽－人锌指蛋白70和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽—人锌指蛋白７０，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人锌指蛋白７０的多核苷酸的用途。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种多肽——人锌指蛋白70，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。
技术介绍
真核基因的转录调控对于基因的正常表达及发挥生物学功能是十分重要的，通常由转录调控因子来完成这一过程。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录，编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。转录因子对基因表达的调控主要通过转录因子与特定的DNA序列结合、转录因子间的相互作用及转录因子与常规转录机构的相互作用在完成。根据结构基序的不同，已知的DNA结合蛋白可主要分为两类含有螺旋-转角-螺旋基序的蛋白及锌指蛋白。锌指蛋白是一种DNA结合蛋白，最早在非洲爪蟾RNA聚合酶III介导的5SrRNA基因转录因子TF III A蛋白的氨基酸序列中发现。此后发现锌指蛋白在不同生物的各种组织中均有表达，这些组织包括造血细胞、脑、神经系统、表皮组织、各种与分泌吸收相关的组织及与肿瘤和无限增殖细胞系相关的组织等。据估计在人类基因组上锌指蛋白基因超过了1％(Bellefroid et al.，1989；Pellegrino andBerg，1991)。锌指蛋白的锌指结构主要有以下几种C2H2构型、C2C2构型、C2HC构型、C2HC4C构型、C3H构型、C3HC4构型(Dai KS et al.，1998)。其中含C2H2构型的锌指蛋白基因构成人类基因组最大的一族基因(Berker et al.，1995)。锌指蛋白的C2H2构型如下典型的锌指结构在长度上大约由28个氨基酸残基构成，为Cys-Cys……His-His排列，锌指单元包含有一段相对保守的序列Cys-X2-4-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2-His-X2-4-His(Bray，p.et al.，1993)。锌指结构中两个保守的Cys参与组成一个反向平行的β折叠，两个保守的His参与组成α螺旋，这两个结构与核心的Zn原子结合形成一个紧密的球形区域(Pabo，C.A.and Sauer，R.T，1992)。此类锌指蛋白往往具有1个到37个锌指结构(Rhodes，D.and Klug，1993)。除了保守的锌指结构，连接两个相邻的Kruppel的C2H2构型锌指蛋白常常但不总是包含保守的特异性氨基酸序列TGEKP(Bray，p.et al.，1993)。在锌指蛋白中，Zn的作用是使蛋白质分子形成指型构象的骨架与DNA结合。锌指结构在许多与“蛋白-核酸”和“蛋白-蛋白”相互作用有关的蛋白里都有发现。锌指蛋白可以与双链DNA(dsDNA)或单链RNA结合，执行着许多重要作用，其最重要的功能涉及基因的转录调控，并可能同时有信号传递因子的作用(EMBO J.121363-1374，1993)。现有的研究表明，C2H2类型的锌指结构域在发育调控中起关键作用。例如，在Drosopila Kruppel(Rosenberg，1986)和hunchback(Tautz，1987)锌指蛋白中，此结构域与胚胎模式形成有关；在鼠Krox-20锌指蛋白中，此结构域与后脑模式形成及细胞增殖控制有关(Chavrier，1988；Wilkinson，1989)，GL13在常染色体显性发育异常Greig综合症中(vortkamp，1991)中；有些锌指蛋白基因与肿瘤形成有关，如WT1在Wilm’s肿瘤及先天性生殖尿道发育中(Haber，1990)。Hairy-wing基因的抑制基因(su(Hw))编码一个锌指蛋白——SUHW，它可以结合到gYPsy基因并阻止基因增强子的刺激转录作用。研究发现，SUHW只有插入在增强子和启动子之间的时候才会有作用。进一步的研究显示，SUHW与和增强子结合的蛋白并没有相互作用。(Mol Cell Biol 1994 Sep；14(9)5645-52)在研究DNA的变形和增强子受阻遏的关系时，通过检查凝胶电泳的迁移率发现SUHW可以改变DNA的结构。实际上，SUHW可以导致DNA结构的改变，这种改变不是直接的DNA结构的弯曲，而是与已有弯曲结构的丢失有关。总的说来，SUHW可以增加DNA的柔韧性，而DNA的弯曲并不能完全阻遏增强子，所以SUHW阻止基因增强子的刺激转录作用的原因是增强的DNA的柔韧性可以帮助SUHW与支持相距很远的增强子和启动子的相互作用的蛋白之间的相互作用。(Mol Cell Biol 1994Sep；14(9)5645-52)SUHW蛋白可以调控由于gypsy反转座子的突变，通过抑制转录增强子的功能，转录增强子定位于远离su(Hw)结合位点的地方。(Genetics 1996Feb；142(2)425-36)通过对果蝇的研究发现，Hairy-wing基因的抑制基因——su(Hw)的突变会引起雌性果蝇的不孕症。Hairy-wing的抑制基因的抑制突变是插入于gyPsy反转座子的。Gypsy可与SUHW蛋白结合，对SUHW结构的研究发现，SUHW含有12个锌指结构，它们可以分为4类核心的(6-10)；有作用但非核心的(1，2，3，11)；不重要的(5，12)；抑制的(4)。在羧基端的737-880位的氨基酸残基组成了对雌性生殖有重要作用的功能域。总的结论是SUHW可以阻碍卵子生成。(Mol CellBiol.1996 Jul；16(7)3381-92)gypsy反转座子会导致组织特异性的显型突变，而su(Hw)的突变可以使显型突变的结果恢复，此外，su(Hw)基因还可调节gypsy的转录。Gypsy编码了一个全长为7.0kb的RNA，在唾液腺前体和胚胎的脂肪组织中特异表达。而这些表达都离不开su(Hw)基因的参与，证明su(Hw)蛋白是gypsy转录的正向刺激因子。su(Hw)中锌指结构的突变会影响其与DNA的结合，并诱导lacZ报告基因的转录。su(Hw)中氨基末端的缺失会导致胚胎脂肪组织和成人卵巢组织的lacZ无法表达；而亮氨酸的拉链结构域的突变则会造成胚胎脂肪组织lacZ表达的提高、成人卵巢组织的lacZ表达的降低。(Genetics 1995 Jan；139(1)215-28)根据氨基酸同源比较的结果，本专利技术的多肽被推断鉴定为一种新的人锌指蛋白70或人Hairy-wing基因抑制蛋白70(HZNF70/HSUHW70)。其同源蛋白是人的已有锌指蛋白dJ 322P7.1，蛋白号是AL023799。由于如上所述人锌指蛋白70蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白70蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白70蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人锌指蛋白70以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白70的多核苷酸的重组载体。本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人锌指蛋白７０，其特征在于它包含有：〈２１０〉２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]